NeuroD在大鼠脊髓损伤过程中的特异性表达

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目的探讨大鼠脊髓损伤过程中神经源性分化因子(Neurogenic Differentiation,NeuroD)的分布、变化及规律,进而研究其对脊髓损伤模型的影响。方法SD大鼠腹腔麻醉,无菌条件下显露并咬除T10棘凸及椎板,显露其下方的硬脊膜,采用改良Allen’s打击法进行打击建立急性脊髓损伤模型。假手术对照组同法暴露,但不损伤脊髓。建模成后采用免疫组织化学法检测NeuroD在脊髓中分布情况;应用RT-PCR方法检测在大鼠脊髓损伤不同时段NeuroD mRNA的表达变化;应用蛋白质免疫印迹(Western Blotting)对NeuroD蛋白在鼠脊髓损伤不同阶段的表达进行半定量分析,进而确定NeuroD在SCI大鼠脊髓中表达的规律。结果免疫组化提示NeuroD主要表达在脊髓灰质中,白质中未见阳性反应细胞。NeuroD阳性细胞经常成团排列,分布于损伤处与正常细胞的交界处。RT-PCR和蛋白免疫印迹结果提示NeuroD在大鼠脊髓损伤后不同时期都有表达:从脊髓损伤后第1天开始,NeuroD的表达呈现明显升高,在第5天达到最高峰,随后逐渐降低。结论在大鼠脊髓损伤后的不同阶段,NeuroD的表达在时间和空间上有明显的变化差异:损伤后,NeuroD表达呈现升高的水平,到术后第5天达到最高峰;NeuroD主要成团分布于损伤部位和正常细胞的交界处。可见,脊髓损伤会促进NeuroD增生。推测NeuroD的主要作用是:1、在损伤后对神经细胞的再生修复起作用;2、NeuroD成团出现在正常与损伤细胞的交界面,是否对神经干细胞有定向的引导作用,还有待进一步实验证实。
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