【摘 要】
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研究目的：弓形虫棒状体蛋白18(Rhoptry protein 18,ROP18)位于速殖子棒状体内,属排泄分泌抗原,在虫体侵入宿主细胞时,有促进侵入的作用.本试验主要制备弓形虫ROP18 抗体,
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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研究目的：弓形虫棒状体蛋白18(Rhoptry protein 18,ROP18)位于速殖子棒状体内,属排泄分泌抗原,在虫体侵入宿主细胞时,有促进侵入的作用.本试验主要制备弓形虫ROP18 抗体,研究ROP18 在弓形虫虫体内的位置和分布.材料方法：培养、收集、纯化弓形虫速殖子,根据ROP18 基因序列,设计合成ROP18 基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP18 基因片段,克隆至原核表达载体pET32a,大肠杆菌表达弓形虫ROP18.应用纯化的该重组蛋白免疫绵羊,制备抗弓形虫ROP18 抗体.采用免疫荧光法研究ROP18 在弓形虫生长过程中的位置和分布.结果：以弓形虫基因组DNA 为模板,PCR扩增出1.6 kb ROP18 基因片段,成功构建重组质粒pET-ROP18,所表达的融合蛋白大小约为70 kD.重组蛋白的抗血清能够识别弓形虫的ROP18 天然蛋白.ROP18 位于弓形虫虫体膜和棒状体内,入侵宿主细胞后集中在纳虫泡膜上.结论：质粒pET-ROP18 在大肠杆菌中得到了表达,为进一步利用该重组蛋白进行弓形虫病免疫诊断及入侵机制的研究奠定基础.
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