【摘 要】
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目的：探究miR-34a对胃癌干细胞样特性(自我更新能力、化疗抵抗及转移能力)的影响并试图阐明miR-34a调控癌基因Bmi-1的机制.方法：慢病毒感染结合流式细胞分选术获得稳定的miR-34a上调的胃癌细胞株.采用无血清微球体培养法、平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、CCK-8细胞毒性实验和Transwell迁移实验检测rniR-34a对胃癌干细胞样特性(自我更新能力、化疗抵抗及转移能力
【机 构】
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复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科,上海 200032
【出 处】
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第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议
论文部分内容阅读
目的：探究miR-34a对胃癌干细胞样特性(自我更新能力、化疗抵抗及转移能力)的影响并试图阐明miR-34a调控癌基因Bmi-1的机制.方法：慢病毒感染结合流式细胞分选术获得稳定的miR-34a上调的胃癌细胞株.采用无血清微球体培养法、平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、CCK-8细胞毒性实验和Transwell迁移实验检测rniR-34a对胃癌干细胞样特性(自我更新能力、化疗抵抗及转移能力)的影响.Western-blot法检测蛋白水平的改变，探索miR-34a调控癌基因Bmi-1的机制.功能补偿实验(无血清微球体培养法、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验)探索miR-34a是否通过调控Bmi-1影响胃癌干细胞样特性.结果：miR-34a过表达后自我更新、化疗抵抗性和转移潜能均下降，这表明miR-34a负性调控胃癌干细胞样特性.Westem blot结果显示miR-34a上调后可抑制靶基因c-myc和Bmi-1的表达水平，而上调c-myc可以上调被miR-34a抑制的Bmi-1表达水平，这表明miR-34a可通过靶向c-myc下调Bmi-1.细胞功能补偿实验结果显示miR-34a过表达后细胞自我更新能力、转移潜能均下降，此时过表达Bmi-1能使细胞自我更新能力和转移潜能恢复，这表明上调Bmi-1可以逆转miR-34a所导致的胃癌干样特性抑制.结论：miR-34a负性调控胃癌细胞干样特性，并可通过靶向c-myc下调Bmi-1； miR-34a可通过调控Bmi-1影响胃癌细胞干样特性.
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