【摘 要】
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将猪细小病毒(PPV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA方法筛选,以有限稀释法稀释3次,得到分泌抗PPV单克隆抗体(McAb)细胞株15株,并对其进行较详细的染色体计数、抗体亚类、ELISA交叉实验、Western blotting等生物学特性鉴定.染色体计数发现其核内染色体数均符合杂交瘤细胞染色体数,抗体属性为IgG1,交又实验等特异性分析发现该单抗只
【机 构】
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中国农科院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病学研究室 黑龙江 哈尔滨 150001,黑龙江八一农垦大学 动物科学技术学院 黑龙江 大庆 163319
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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将猪细小病毒(PPV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA方法筛选,以有限稀释法稀释3次,得到分泌抗PPV单克隆抗体(McAb)细胞株15株,并对其进行较详细的染色体计数、抗体亚类、ELISA交叉实验、Western blotting等生物学特性鉴定.染色体计数发现其核内染色体数均符合杂交瘤细胞染色体数,抗体属性为IgG1,交又实验等特异性分析发现该单抗只特异地与PPV发生反应,而不与猪圆环病毒(PCV2),猪伪狂犬病毒(PRV)、猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)等发生交叉反应.将杂交瘤细胞(5×105-5×106个/ml)注射BALB/c小鼠制得的腹水抗体效价介于1:25600-1:204800.经单抗亚型鉴定所有单克隆抗体均为IgG1亚类,而所有单克隆抗体的轻链均为κ型.Western blotting结果显示,15株单抗中2株针对VP1发生反应,12株针对VP2、VP3发生反应,还有1株没有印记.没有产生印记的单抗株可能识别的是PPV的构象表位,还需进一步验证.本实验制备并鉴定了15株抗PPV抗体,为猪细小病毒的研究和诊断试剂盒的研制奠定了基础.
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