【摘 要】
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建立了TaqMan-MGB探针荧光实时定量PCR检测鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)的方法.根据Genbank上已提交的其它DEV毒株的一段核酸序列设计普通PCR引物,扩增出了一段498bp长
【机 构】
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动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心,四川,雅安,625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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建立了TaqMan-MGB探针荧光实时定量PCR检测鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)的方法.根据Genbank上已提交的其它DEV毒株的一段核酸序列设计普通PCR引物,扩增出了一段498bp长的DEV-CHv特异性核酸片段,对该PCR产物进行测序后根据其序列设计合成了TaqMan-MGB探针和引物;对定量PCR反应体系中的Mg2+工作浓度和TaqMan-MGB探针的工作浓度进行了优化后,将498bp常规PCR产物进行纯化后作为标准品,通过10倍系列稀释法构建标准曲线,对反应的结果进行绝对定量;所建立起的TaqMan-MGB探针荧光实时定量PCR检测DEV-CHv的方法可以表示为:95℃预变性60s,94℃变性30s,60℃退火和延伸30s,共进行50个循环,采用25μl反应体系。
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