伏马菌素B1对HL-7702细胞周期的影响研究

来源 :中国毒理学会第五次全国学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chensheng76
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  目的 从细胞周期调控角度探讨伏马菌素(FB1)在人正常肝细胞增殖中的作用,并从分子水平上对细胞周期调控因子及调控通路加以研究旨在阐明FB1诱导细胞周期作用的分子机理.方法 以0.0μM、0.1μM、1.0μM、10.0μM、100.0μM剂量的FB1处理人正常肝细胞株HL7702细胞24h、48 h、72 h、96 h,检测细胞增殖(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)释放率(比色法)、细胞周期分布(流式细胞分析术)、Cydin E及p21mRNA表达的变化(RT-PCR法)、Cyclin E及p21蛋白表达的变化(Western blot法).结果 同剂量组随处理时间的延长大体呈现出抑制率逐渐加大而后又减少,最后逐渐促进细胞生长的态势,各浓度组的最高抑制率集中于48 h至72 h之间;各剂量FB1处理细胞48 h时与对照组相比发生了G0/G1期阻滞,说明具有抑制细胞增殖的作用;但各剂量组中随着处理时间的延长,G0/G1期的比例呈先升高后降低的趋势,且随着处理剂量的增加这种变化幅度增加.RT-PCR检测发现FB1降低了Cyclin E mRNA的表达,同时增加了P21 mRNA的表达使得细胞增殖在48 h至72 h发生抑制;随着处理时间延长至96 h,P21 mRNA表达减少,促使细胞由生长受抑制发展为促进生长.当低剂量(0.1μM)FB1处理时,Cyclin E蛋白表达的变化可能对细胞活力影响较大,而高剂量(1.0 μM和10.0 μM)FB1处理时,可能P21蛋白表达的变化对细胞活力影响较大.结论 随处理时间的延长FB1通过影响人正常肝细胞HL7702 Cyclin E和p21基因mRNA表达和蛋白表达,使G0/G1期细胞数目减少,改变了细胞周期分布,对HL-7702细胞产生先微弱抑制后促进生长的作用.我们的结果提示FB1可能通过影响细胞周期调控因子的表达及细胞周期的变化,在其致癌作用中发挥一定作用,为进一步研究FB1的致癌机制提供参考.
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