论文部分内容阅读
目的：建立小鼠睾丸器官体外培养模型,观察双酚A(bisphenol A,BPA)对小鼠睾酮合成的影响以及3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a羟化酶(P450c17)及波形蛋白(Vimentin)表达的变化,以探讨BPA对雄性小鼠生殖系统的影响机制.方法：选用日龄相近的健康昆明种雄性小鼠,无菌法取出双侧睾丸.解剖显微镜下剥离睾丸附属组织,去除睾丸被膜,将实质部分切割成1mm×1mm×1mm左右大小的组织.每个培养瓶中放入6个睾丸组织,加入5ml完全培养基.置于旋转培养装置中,34℃恒温旋转培养72h.将睾丸组织随机分为五组：DMSO对照组、低剂量组、中低剂量组、中剂量组以及高剂量组(0、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M BPA处理).应用HE染色光镜下观察睾丸组织形态学变化,放射免疫法检测培养液睾酮浓度,免疫组织化学联合PCR技术检测3βHSD、P450scc、P450c17及Vimentin等相关蛋白的表达情况.结果：对照组曲细精管结构完整,精原细胞分布紧靠基底膜,支持细胞与生殖细胞连接紧密,间质内充满间质细胞.10-4M剂量组曲细精管内部分精原细胞从基底膜剥离,管腔中细胞稀疏,生殖细胞和支持细胞数量减少,部分间质细胞核固缩或呈絮状改变.10-5M组也有不同程度的改变, 其他剂量组与对照组比较未见明显差别；对照组与各剂量BPA处理组睾酮浓度都随着时间的延长而降低.与DMSO对照组相比,10-6M BPA处理组在Day2时睾酮分泌降低(P＜0.05)；10-5M BPA处理组在Day1时睾酮分泌降低(P＜0.05),在Day2时分泌增加(P＜0.05)；104MBPA处理组睾酮浓度降低(P＜0.01)；10-7M BPA处理组对睾丸组织睾酮的分泌没有影响；睾酮合成相关酶3βHSD、P450scc、P450c17及Vimentin基因表达及蛋白表达均下降,高剂量组尤为明显.结论：本实验小鼠睾丸体外培养模型成功.BPA可作用于睾丸间质细胞,降低睾酮的合成量.在低剂量及中剂量BPA时,可通过下调睾酮合成过程中的限速酶P450scc、P450c17及3βHSD等相关蛋白的表达,干扰睾酮的合成；在高剂量BPA时,睾丸的形态结构也受到一定程度的影响,睾酮合成相关酶的表达受到抑制,共同影响了睾酮的分泌量.