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目的:前期研究发现,运用蛋白转导技术,使来源于人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的反式激活蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)与SARA羧基末端作用域结合,制备的可溶性PTD-SARA/SBD融合蛋白,可跨膜转导入人肾小管上皮细胞(HK2)以及腹膜间皮细胞(HPMCs)发挥作用.本实验在此基础上,进一步验证PTD-SARA/SBD融合蛋白在腹膜透析大鼠模型中抑制上皮间质转分化及改善腹膜功能的作用,探讨含蛋白转导域的SARA融合蛋白(PTD-SARA/SBD)对慢性腹膜透析大鼠腹膜结构和功能的作用.
方法:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹膜透析液(PDF)制各腹膜透析大鼠模型.28只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(n=8);腹膜透析模型组(n=10,PDF100ml/kg); PTD-SARA/SBD蛋白干预组(n=10, PDF 100ml/kg+ PTD-SARA/SBD蛋白5μg/ml).4周后行腹膜平衡试验,检测超滤量、葡萄糖吸收率;留取壁层腹膜组织行HE染色;免疫组织化学方法检测大鼠壁层腹膜间皮细胞转分化指标E-cadherin和Twist的表达;Western blotting测定E-cadherin、twist,以及Collagen Ⅰ、TGF-β1、P-Smad3、t-Smad3的表达.
结果:①与正常对照组比较,模型组大鼠壁层腹膜增厚,糖转运率增加,超滤量降低(P＜0.01);免疫组织化学与western blotting检测结果显示E-cadherin表达下调,Twist表达上调(P＜0.01); Collagen Ⅰ、P-Smad3、TGF-β1表达增加(P＜0.01).②与模型组比较,PTD-SARA/SBD蛋白干预组大鼠壁层腹膜糖转运率降低,超滤量增加(P＜0.05);E-cadherin表达上调,Twist表达下调(P＜0.05); Collagen Ⅰ、TGF-β1、P-Smad3表达减少(P＜0.05),各组t-Smad3无明显变化.
结论:PTD-SARA/SBD融合蛋白通过抑制TGF-β/Smads信号通路部分逆转腹膜间皮细胞转分化,从而改善腹膜结构和功能.