【摘 要】
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由于转基因产品对人类、动物的健康、生态环境等存在不确定性与潜在风险,许多国家对转基因产品都制定了标识管理等法规,严加监控并制订了相应的检测标准方法.但在国内现行的相关标准如SN/T1194-2003《植物及其产品转基因成分检测抽样与制样方法》与SN/T 2584-2010《水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法》中,没有具体规定要把样品粉碎至具体的多大颗粒,迄今为止也未见其他确切的报道.然
【机 构】
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福建出入境检验检疫局境检验检疫技术中心,福建福州;厦门塔斯曼生物工程公司,福建厦门 福建省种子总站
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由于转基因产品对人类、动物的健康、生态环境等存在不确定性与潜在风险,许多国家对转基因产品都制定了标识管理等法规,严加监控并制订了相应的检测标准方法.但在国内现行的相关标准如SN/T1194-2003《植物及其产品转基因成分检测抽样与制样方法》与SN/T 2584-2010《水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法》中,没有具体规定要把样品粉碎至具体的多大颗粒,迄今为止也未见其他确切的报道.然而,样品的制作以及DNA提取等前处理措施,是PCR检测结果准确与否的至关重要的前提.为了提高检测结果的准确性,建立规范的技术操作程序,本报告对影响米制品中转基因成分检测结果准确性的主要前处理因素进行分析,采用经过研磨、高温、高压加工处理的转基因检测难度较大的米制品白粿干(也称年糕片),通过添加转基因大米科丰6号粉末,配制成模拟转基因样品,就样品研磨细度与DNA提取过程中的CTAB裂解缓冲液温育时间等样品前处理方法与实时荧光PCR检测体系对检测结果的影响进行分析与优化,为建立精准转基因检测方法提供科学依据.结果表明,提取的DNA含量在样品颗粒细度与CTAB缓冲液温育时间的9种处理组合间都有极显著差异,其中,样品颗粒细度>100目与CTAB缓冲>液温育时间>8h(过夜)处理的样品DNA提取效果最好;优化后的PCR反应体积为20μL的正、反向引物用量分别为0.6μL、探针用量为0.2μL(浓度均为10u mol/L)、51μL的DNA原液;样品颗粒细度>100目、CTAB缓冲液温育时间>8h(过夜)处理组合的荧光PCR检测结果最好.采用最优前处理组合,样品的主要转基因成分检出限从公认的转基因含量质量分数0.01% (W/W)降到0.001%(W/W),检测灵敏度提高10倍,有效提高了米制品转基因成分检测结果的准确性.
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