甾体药物具有很强的抗感染、抗过敏、抗病毒和抗休克等药理作用。近年来,甾体药物在医疗领域的应用范围不断扩大,被广泛用于治疗风湿病、心血管、胶原性病症、淋巴白血病、人体器官移植、抗肿瘤、细菌性脑炎、皮肤病、内分泌失调、老年性疾病等,其产量仅次于抗生素是第二大类药物。通过对甾体分子环或支链进行改造,是获取高药用价值的甾体化合物的重要途径。目前甾体的羟基化是对甾体化合物最重要的修饰,羟化后的甾体作为重要的中间体,是合成高附加值甾体化合物的关键一步。19位羟化的甾体可用于制备19-去甲甾体,是用于合成炔诺酮、米非司酮、诺龙苯丙酸酯、替勃龙等多种高效甾体激素药物的重要中间体,具有巨大的市场价值。但由于甾体类化合物19位角甲基由于具有很大的空间位阻,是目前公认的最难被羟化的位点。目前合成19羟基甾体化合物只能利用路线十分复杂,产物收率低的化学法合成工艺^[1]。由于缺乏能够在甾体19位上羟化的酶或微生物,目前还无法实现19羟基甾体化合物的生物法制备。因此得到19位羟化的微生物或酶是生物法合成19位羟基甾体的前提。本实验室前期得到一株丝核薄膜革菌,可转化甾体底物可托多松生成19羟基和11β羟基可托多松（氢化可的松）^[2],但存在着转化率低,副产物多等缺点。我们推测该菌株中存在一个或多个甾体羟化酶,为了从该菌株中克隆到羟化19位的羟化酶,我们基于RNA测序技术得到了该菌在不同产酶诱导条件下的转录组数据,通过基因序列拼接、注释与差异表达分析,共获取了43条P450基因序列;依托毕赤酵母异源表达筛选体系我们对P450酶进行了功能筛选并得到了一型P450酶,产物鉴定结果显示该酶可以实现可托多松19和11β位的羟化,为生物法制备19-去甲甾体打下基础,并为研究甾体羟化酶的立体选择性机理提供了前提。