鹦鹉热嗜衣原体Ⅲ型分泌系统效应蛋白的筛选鉴定及致病作用的探究

来源 :纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:handsomeboywp
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  本研究采用Effective T3和BPBAac生物信息学软件对Cps 942个编码基因进行预测筛选T3SS效应蛋白,选取12个基因提取Cps6BC标准株DNA模板,PCR扩增预测CpsT3SS效应蛋白编码基因,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中构建重组质粒pGEX-6P-1/目的片段,经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E. coli BL21中,进行IPTG诱导表达获得可溶性蛋白。GST纯化树脂纯化重组蛋白,然后经皮下注入免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体,并以其为一抗,应用间接免疫荧光(IFA)检测预测蛋白在感染细胞的定位情况,以筛选Cpn分泌性蛋白。其中cpsit_844,cpsit_0846在感染后12h即可见分泌,并且cpsit_0844,cpsit_0846与沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体和鼠型衣原体抗血清无交叉反应,提示其为cps特异分泌蛋白。
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