【摘 要】
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本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)制备特异性单克隆抗体。方法是以梅山猪肝脏总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增猪hp基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-KG
【机 构】
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华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30670091);吉林大学农学部引进人才启动基金(4305050102B9,4305050102B6)
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本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)制备特异性单克隆抗体。方法是以梅山猪肝脏总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增猪hp基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-KG和pET-32a上,转化至E.coliBL21中,IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白。用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠,用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测,通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株,制备单克隆抗体。结果表明筛选到2株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3B4和3C8。Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性。
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