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背景:碱性成纤维生长因子(b FGF)与血管内表皮生长因子(VEGF)均是重要的促血管新生因子,肿瘤组织中VEGF、b FGF及其受体高表达,并对肿瘤的生长和高密度血管化有促进作用,VEGF和b FGF能够协同性地促进血管的新生,从而促进肿瘤的生长和转移。本课题组前期通过噬菌体展示等技术筛选到与血管新生密切相关的VEGF/b FGF表位肽和模拟肽,构建多表位重组复合多肽(VBP3),构建肿瘤疫苗,用于抑制肿瘤血管新生和抑制肿瘤的生长恶化转移。目的:同时阻断VEGF和b FGF与受体的结合,以阻断其信号通路的转导,从而抑制肿瘤的生长及转移。方法:原核表达载体VEGF/b FGF复合多肽;通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3复合多肽蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗b FGF和抗VEGF的多克隆抗体及酶联免疫吸附试验ELISA方法检测抗体效价和特异性;成管试验研究抗体对HUVEC细胞的成管影响;CCK-8检测抗体对肿瘤细胞的增殖抑制的影响;Western Blot检测抗体对b FGF和VEGF下游信号通路中Erk1/2和Akt磷酸化的影响;体外小鼠实验验证VBP3复合多肽疫苗对肿瘤的治疗作用。结果:VBP3复合多肽疫苗免疫小鼠后能够在其体内产生特异性的抗VEGF和b FGF抗体;CCK-8实验中,抗VBP3的多克隆抗体能够在体外抑制小鼠肺癌LL/2、黑素瘤B16及人乳腺癌SKOV3等肿瘤细胞的增殖;Western Blot结果表明,抗VBP3的多克隆抗体能够在体外抑制FGFR和VEGFR下游信号通路中Erk1/2和Akt的磷酸化;成管实验结果证明,抗VBP3的多克隆抗体能够在体外一定程度地抑制HUVEC的成管;在体内实验中发现,与对照组小鼠相比较,VBP3复合多肽疫苗能够延缓免疫组荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期,免疫组化也证明VBP3复合多肽疫苗能够抑制肿瘤血管的新生。结论:VEGF/b FGF复合多肽疫苗能够作为一种疫苗抑制肿瘤的生长。