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目的：研究重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫小鼠诱导细胞免疫应答的特点，制备一批细胞免疫应答检测用参考品，规范乙型肝炎疫苗细胞免疫试验条件和操作。方法：应用3μgHBsAg免疫小鼠背部皮下，于免后4、7、14、25d分离脾单个核细胞(MNC)，ELISPOT法检测MNC经HBsAgMHCⅠ类多肽S28-39刺激产生IFN-γ能力。背部皮下分别免疫小鼠0.1μg，0.25μg，0.5μg，1μg，2μg，4μg，8μg的HBSAg，于免后7d，检测MNC分泌IFN-γ水平。分别免疫小鼠2μg,4ug HBsAg，免后7d，检测MNC分泌IFN-γ水平。结果：7d时，IFN-Y阳转率达到一定强度并持续到14d。1μg组可检测小鼠IFN-γ阳转，免疫剂量与IFN-Y阳转率存在剂量效应关系(r=0.951,P=0.049)。2μg HBsAg组IFN-Y阳转率在50-75％之间;4μg组IFN-y阳转率均为75％。结论：应用ELISPOT法检测1针HBsAg诱导小鼠产生IFN-γ最佳检测时间为7d，适宜的免疫剂量在2-8μg之间，同时制备一批细胞免疫应答检测用参考品作为内控参考品。