近年来,随着液相色谱-质谱联用技术的发展,特别是反相色谱-电喷雾质谱的联用广泛用于各种化合物的定量分析.由于氨基酸性质差别很大,等电点有很大的差别,因此在电喷雾源质谱中,在正离子和负离子模式均不能得到所有氨基酸很好的灵敏度.另外,由于大部分氨基酸的极性比较大,因此很难用常规的反相色谱柱进行分离.综上,目前利用反相色谱-电喷雾质谱联用分析20 种天然氨基酸需要解决的就是灵敏度低和分离度低这两个关键问题.本实验中引入了磷酰化策略建立了氨基酸的反相色谱-电喷雾质谱联用技术.首先,磷酰化反应是根据Atherton-Todd 反应进行,能选择性的与氨基酸的氨基以及赖氨酸的侧链氨基定量的反应,反应条件温和且在30 分钟内完成.另外,磷酰化后的所有氨基酸在简单流动相0.1％甲酸：乙腈(70：30)在X BridgeTM 反相C18 柱就能得到很好的分离.同时,在正离子模式下,多反应监测模式(MRM)下进行定量检测,结果显示,该方法灵敏度得到很大的提高,检出限为 0.0005-0.15 μM,定量限为0.0020-0.5 μM,与目前氨基酸的最好的检测灵敏度相当.最后,为了验证该方法的实际应用,对多个乳腺癌患者的血液样品中的氨基酸进行分析,结果显示,20 种氨基酸在所有样品中被检出并具有很好的灵敏度和分离度.该方法为氨基酸的分析提供了一种简单、灵敏的反相色谱-电喷雾质谱的联用方法,可以用于各种生物样本中氨基酸的分析.