背景:猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性、致死性传染病,在我国被列为一类传染病,给养猪业造成了严重的经济损失。随着疫苗的使用,虽然没有再发生过大规模爆发流行,但仍然呈散发性流行趋势。CSFV与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和羊边界病毒(BDV)均属于瘟病毒属,同源性较高,在血清学诊断上出现明显的交叉反应;而且CSFV临床表现日趋多样化,常以混合感染的形式出现,很难区分疫苗接种猪与感染猪,导致猪瘟的防控与净化困难力度加大。猪瘟E2蛋白可诱导机体产生保护性抗体,抵抗病毒的入侵,是建立猪瘟诊断方法和研制疫苗的目标蛋白。单克隆抗体的特异性和敏感性特性,能够快速、灵敏的鉴定和识别猪瘟抗原。目的 :获得稳定分泌猪瘟病毒E2蛋白单抗的单克隆细胞株,制备特异性单克隆抗体,为研发猪瘟抗原快速检测技术、新型疫苗、猪瘟诊断方法和猪瘟抗原结构与致病机理等奠定重要基础。方法 :采用杆状病毒表达系统表达的猪瘟病毒E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将免疫效价较高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光方法进行筛选,经有限稀释法亚克隆3次,获得稳定分泌猪瘟单抗的单克隆细胞株,并对单抗亚型、特异性、腹水效价和病毒中和活性等生物学特性进行鉴定。结果 :成功获得3株稳定分泌E2蛋白单克隆抗体的细胞株,经ELISA,IPMA,western blot等特异性实验鉴定,3株单抗均能与CSFV反应,而与BVDV,PCV2和PRRSV均无交叉反应;且制备的腹水均具有较高的效价。结论 :本研究成功筛选出3株稳定分泌CSFV E2蛋白的单克隆抗体细胞株,均能特异性的识别猪瘟病毒,为猪瘟病毒抗原检测技术奠定了基础。