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目的:探讨新型雌激素受体(ERα、ER β)共调节因子即活化T细胞核因子3(NFAT3),在乳腺癌细胞中对雌激素受体转录活性的影响。方法:实验室前期研究中,以雌激素受体β(ER β)的AF1结构域(其中含有部分DBD区域)为诱饵蛋白,通过酵母双杂交方法筛选出 NFAT3,构建表达载体pcDNA3-NFAT3。本实验利用ER α能与雌激素应答元件(ERE)一致序列结合的特点,选用受ERE一致序列调控的荧光素酶基因(ERE-LUC)作为报告基因,将pcDNA3-NFAT3表达质粒(0．5μg)与ER α表达载体 (0．025 μg)及荧光素酶报告基因质粒pERE-LUC(0．2μg)、表达β-半乳糖苷酶的质粒(0．1 μg)分别共转染乳腺癌ER α阳性细胞株MCF-7,MDA-MB-435和T47D细胞。通过检测荧光素酶活性测定ER α的转录活性。测定NFAT3对受ER调节的 pS2基因转录影响的转染实验中,转染pS2-LUC(0．5 μg)、表达β-半乳糖苷酶的质粒(0．1μg)、ER α表达载体(0． 025μg)、ER β表达载体(0．025 μg)和pcDNA3-FLAG— NFAT3(1．0 μg)、pcDNA3-FLAG(1．0 μg)的表达质粒。β-半乳糖苷酶报告基因用于校正细胞转染效率。转录激活活性为细胞转染效率校正后的荧光素酶活性。结果:在乳腺癌细胞MCF-7中,当雌激素存在和不存在时,与空载体比较,0．5 μg的NFAT3使ER α的转录活性提高了约 1．5和1．8倍,在MDA-MB-435细胞中,分别提高1．7倍和2．0倍,在T47D细胞中,分别提高1．5倍和1．9倍。在乳腺癌细胞MCF-7中,利用内源性ER α和ER β,雌激素存在和不存在时,与空载体比较,1．0 μg的NFAT3使pS2 的转录提高到约2．0和1．9倍。当NFAT3分别与ER α、ER β共转染,雌激素存在和不存在时,与空载体比较,1．0μ g的NFAT3使pS2的转录分别提高到约2．0和2．1倍、2．0 和2．0倍。结论:NFAT3以配体不依赖的方式提高ER α的转录活性,并且没有细胞特异性。NFAT3以配体不依赖的方式提高pS2的转录。NFAT3通过与ER相互作用而改变ER的转录活性,是ER信号途径中的新型调节因子。