草酸盐高效降解菌的筛选及其酶学性质研究

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:yurui4010
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
草酸盐降解菌及其降解酶的研究具有很多潜在的应用价值。一方面可用于致病真菌Sclerotinia sclerotiorum所引起的重要经济作物菌核病的防治,及抗病性转基因植物的生产:另一方面,草酸盐降解酶被用于诊断和治疗与草酸盐相关的疾病,如肾结石,以及环境的生物治理。本论文分离筛选出具有较强草酸盐降解能力的新菌,并对该菌降解酶的酶学性质及降解机理进行了研究。在酸性介质中草酸能够催化重铬酸钾对次甲基蓝的氧化脱色反应,这种催化效率与草酸浓度呈正相关,据此建立了次甲基蓝-重铬酸钾体系测定草酸的方法。实验证明,在660 nm处不加草酸与加草酸的次甲基蓝-重铬酸钾体系反应后的吸光度差值△A在0~80μg/mL范围内与草酸浓度呈线性关系,线性方程为:△A=0.0984ρ草酸-0.0044,相关系数为0.9986。反应的最适条件为3.752×10-5mol/L次甲基蓝、0.12mol/L H2SO4和2×10-3mol/L K2Cr2O7。以草酸盐为唯一碳源和能源,从土壤中分离筛选获得一株能够降解草酸及其盐类的细菌,命名为OXJ-11。该菌在形态培养基形成的菌落为乳白色,圆形;革兰氏阴性染色为阴性杆菌;经电镜观察,为端生双鞭毛。接触酶阳性:不还原硝酸盐。能够在温度25℃-35℃范围内和pH6.0-10.0范围内好氧生长。根据其形态特征、生理生化特征及16SrRNA序列同源性分型,OXJ-11为Pandoraea属的一株新菌。这种菌能够合成草酸盐降解酶。OXJ-11产酶的最适发酵培养基配方为:0.5%草酸钠,0.3%酵母浸粉,0.05%MgSO4·7H2O,最适温度为30℃,pH为6.0-7.0。Pandoraea sp.OXJ-11的草酸盐降解酶为底物草酸盐诱导酶。以次甲基蓝-重铬酸钾氧化还原法测定反应体系草酸盐的减少量,建立了草酸盐降解酶的酶促反应体系。该酶为胞壁酶,超声破碎的条件为:输出功率200w-300w,超声破碎0.5s、间歇5s,破碎总时间7min。草酸盐降解酶的最适初始底物浓度为0.7mg/mL;最适反应温度为30℃;30℃下保温酶活力较稳定;酶反应的最适pH范围较宽为5.5-8.0;粗酶液在pH7.0-8.0范围内保温比较稳定;不同浓度的Fe2+和Cr3+对酶均有抑制作用;SDS对酶有很强的抑制作用;10mmol/L的Mg2+对酶有一定的激活作用;NaCl对酶活力有较大的影响,0.15mol/L NaCl可使酶活力下降约50%,浓度达到0.3mol/L时酶活力完全丧失。草酸盐降解酶的酶解产物之一为二氧化碳,当反应体系中含有阳离子时,二氧化碳会与阳离子反应生成碳酸盐。而过氧化氢不是酶反应产物。甲酸盐为酶解反应的另一产物,但由于OXJ-11菌中含有甲酸盐脱氢酶,因此,甲酸盐被进一步降解生成二氧化碳。OXJ-11菌的草酸盐降解酶所催化的反应,必须在有氧条件下才能进行。草酸和琥珀酸为草酸盐降解酶的可替换底物。ATP和ADP对草酸钠降解酶活性均有不同程度的抑制作用。
其他文献
<正>谋利民之策,献安民之计,促惠民之举,是政协履职的出发点和落脚点,也是推动政协走近人民的重要途径。在纷飞的瑞雪中,省十二届政协委员们带着社会各界的寄托、带着人民群
马铃薯生长情况和周围环境有着密切的联系,在生长期间,经常受到一些不良因素的影响而产生问题,同时还由于生产人员管理水平不高等因素而呈现出了一系列的不良现状,此种因非生
压水堆核电厂稳压器下封头通常需要开70-90个布置较为密集的电加热元件安装孔。本文采用RCC-M和Н-ППУ-01两种压水堆核能设备强度计算标准对某核电工程稳压器下封头电加热
稻-虾综合种养模式是近些年来我国新兴的一种生态高效的新技术养殖模式,在保证粮食产量不减产的前提下,在稻田中开设环沟,高效合理的养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii),对提
本文应用解析法以质子等衡式为依据,先分别算出强,弱酸的酸度,再用加合公式把它们加合起来,以算出混酸溶液的PH,该法比原有方法简便,适用性广,算出的结果也较准确。
4月13日,中国科学家陈竺和法国科学家安娜&#183;德尚、于克&#183;德戴在瑞典首都斯德哥尔摩获颁2018年舍贝里奖。瑞典皇家科学院早前宣布这三位科学家荣获舍贝里奖,以表彰他
司汤达小说《红与黑》中的于连,在法国王朝复辟时期不甘平庸,努力从社会底层向上流社会攀登。他向上爬的过程一波三折,最后幡然悔悟,拒绝与上流社会同流合污。于连的人生道路,深刻
人类历史是不断与各种自然、社会灾害抗争的历史,也是在应对灾害过程中不断探索理想社会发展模式的过程。基于中西方政治哲学理论有关社会正义、世界正义、全球共同体和人类
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield