【摘 要】
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根据溶藻弧菌外膜蛋白W基因的保守序列设计引物,扩增溶藻弧菌外膜蛋白W的主要区域,再根据该序列两端分别设计三个嵌套的特异性引物,与随机引物组合进行热不对称交错PCR(TAIL-
【机 构】
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广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;
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根据溶藻弧菌外膜蛋白W基因的保守序列设计引物,扩增溶藻弧菌外膜蛋白W的主要区域,再根据该序列两端分别设计三个嵌套的特异性引物,与随机引物组合进行热不对称交错PCR(TAIL-PCR)。经三次热不对称交错PCR后,成功扩增出外膜蛋白W完整开放阅读框,测序分析表明该外膜蛋白W的开放阅读框长度为645bp,与GenBank中登录的DQ075316.1,AY944132.1同源性分别为99%,90%。该基因编码214个氨基酸,其信号肽含有22个氨基酸残基。通过基因重组构建原核表达载体PET-OMPW,转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明诱导的目的蛋白约为23KD,与理论推导的一致。该基因的氨基酸序列同登录号为AAY86764.1的溶藻弧菌的同源性为95%,与发光菌属和哈维氏弧菌的同源性分别为92%和86%。实验结果表明,溶藻弧菌外膜蛋白W与其它弧菌属外膜蛋白具有较高同源性,可以作为研制DNA疫苗的抗原基因,为进一步研究DNA疫苗提供理论依据。
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