【摘 要】
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目的 研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)过表达和基因沉默对微波辐射后PC12细胞凋亡的影响,探讨RKIP在辐射诱导神经细胞凋亡中的作用.方法 传代培养PC12细胞,采用NGF将其诱导分
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京 100850
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目的 研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)过表达和基因沉默对微波辐射后PC12细胞凋亡的影响,探讨RKIP在辐射诱导神经细胞凋亡中的作用.方法 传代培养PC12细胞,采用NGF将其诱导分化为类神经元,随机分为假辐射组和辐射组.采用本院自建的微波辐射源,选取平均功率密度为30mW/cm2的微波辐射分化的PC12细胞5min,于辐射后6h和24h进行检测.分别选用载体pcDNA3.0和PGPU6/GFP构建RKIP的正义和反义重组质粒,采用Vigofect介导将其稳定转染PC12细胞.采用免疫印迹检测RKIP表达,原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2及caspase-3表达.利用ImgePr06.0图像分析软件进行定量分析.结果 (1)辐射后6h和24h,RKIP表达均下调,转染pcDNA3.0-RKIP质粒导致辐射后RKIP明显过表达,且显著高于假辐射组,转染RKIP shRNA质粒对辐射后RKIP表达未见明显影响. (2) TUNEL结果表明,辐射后6h和24h,PC12细胞凋亡阳性率均升高.RKIP过表达可明显减少辐射后细胞凋亡,但仍较假辐射组明显增多.RKIP基因沉默则导致辐射后细胞凋亡进一步增多,且显著高于辐射组.(3)辐射后6h和24h,Caspase-3和Bax表达均增加,Bcl-2仅于6h表达减少,导致Bcl-2/Bax比值下降.RKIP过表达对辐射后Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达改变均具有抑制作用,但Caspase-3表达仍显著高于假辐射组,同时,Bcl-2/Bax比值仍明显低于假辐射组.RKIP基因沉默对辐射后Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达改变则均具有加重作用,且Caspase-3表达明显高于辐射组,Bcl-2/Bax比值显著低于辐射组.结论 RKIP在微波辐射诱导神经细胞凋亡中发挥重要调节作用,辐射后RKIP表达下调,导致Bcl-2/Bax比值下降,Caspase-3表达增加,从而促进细胞凋亡发生.
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