绵羊肌肉生长抑制素原核表及其纳米抗体文库的构建与鉴定

来源 :中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:myeclipse76
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  研究目的:本研究以抑制绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)的功能为出发点,通过制备MSTN 纳米抗体,探究一条有效促进动物肌肉生长的新途径.材料方法:(1)绵羊MSTN 的诱导表达,确定ELISA 包被抗原用量.利用IPTG 在大肠杆菌中诱导表达MSTN 成熟肽蛋白并纯化,通过ELISA 和Western blot 方法检测抗原反应原性,优化亲和淘选包被抗原蛋白的浓度.(2)绵羊MSTN 纳米抗体的淘选和鉴定.扩繁M13K07 噬菌体侵染原始文库,构建噬菌体展示抗体文库,噬菌体文库容经滴度测定达到1.8×1012 pfu/mL.利用重组MSTN 蛋白抗原对噬菌体抗体库进行富集、筛选,经过4轮亲和淘选(Panning),获得了一株亲和力高、特异性强的阳性克隆,测序后经BLAST 比对分析证实该克隆序列为骆驼单域重链抗体序列.(3)MSTN 纳米抗体在大肠杆菌中诱导表达与鉴定.
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