一种新型褐藻胶裂解酶的克隆表达及性质研究

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褐藻胶是褐藻的主要组成多糖,其寡糖在功能性食品、医药、化妆品、农业领域中有广阔的应用前景。褐藻胶裂解酶是褐藻胶生产的主要工具酶,对褐藻胶的应用开发有重要意义。本研究从海洋细菌Wenyingzhuangia fucanilytica CZ1127~T的基因组信息出发,利用生物信息学分析技术挖掘出一条新颖的PL7家族褐藻胶裂解酶编码基因aly7a。通过分子克隆技术在大肠杆菌中对目标基因实现了过量表达,并研究了表达蛋白的生化特性、动力学常数及作用方式。获得的褐藻胶裂解酶Aly7A其分子量为38 k Da,反应最适pH为8.0,最适反应温度为35°C。酶活不依赖于二价阳离子,但1 mM K~+对酶活有促进作用。以褐藻胶、聚甘露糖醛酸嵌段(poly M)、聚古洛糖醛酸嵌段(poly G)为底物时,其Vmax分别为10.07 U/mg、57.47 U/mg、48.31 U/mg,Km值分别为0.03 mg/ml、0.28 mg/ml及0.37 mg/ml。该酶的作用方式为内切型,可以产生不同聚合度的褐藻胶寡糖。本研究为褐藻寡糖的制备找到了一种新型工具酶,有利于褐藻胶及褐藻寡糖的进一步研究与应用。
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