【摘 要】
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研究背景:自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)又称天然杀伤细胞,其抗病毒感染、抗肿瘤无MHC限制性,已作为临床细胞免疫治疗肿瘤的一个重要治疗手段。目前常用的检测NK细胞
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研究背景:自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)又称天然杀伤细胞,其抗病毒感染、抗肿瘤无MHC限制性,已作为临床细胞免疫治疗肿瘤的一个重要治疗手段。目前常用的检测NK细胞的细胞毒效应的方法有MTT法、LDH法和Annexin-V/PI双染法。目的 :流式细胞术Annexin-V-FITC/PI双染法与LDH法检测NK细胞活性的比较。方法 :分离外周血单个核细胞,经过一系列细胞因子的刺激,培养17天收获NK细胞。将收获的NK细胞分为两组:A组:肿瘤细胞与NK细胞共培养4h,Annexin-V-FITC/PI双染,上流式细胞仪检测;B组:肿瘤细胞与NK细胞共培养4h,采用LDH试剂盒检测。比较两种方法检测NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的差别。结果 :效靶比为10:1、20:1、40:1两种方法检测结果分别为:A组:20.45±4.32、33.78±5.64、52.39±3.67;B组:45.65±3.58、53.85±2.97、71.55±4.35。p值均<0.05,差异有显著性意义。虽然LDH法检测结果要高于Annexin-V-FITC/PI双染法,但是Annexin-V-FITC/PI双染法可将细胞分为四个组群,较好地区分活细胞、早期凋亡细胞、中晚期凋亡细胞和死亡细胞。而LDH法却无法区分,而且检测结果准确性不佳,可重复性不强,稳定性相对较差。结论 :流式细胞术Annexin-V-FITC/PI双染法可在单细胞水平上监测细胞信号的变化,该方法较其他方法更为准确和客观。
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