石斑鱼IκBα两种亚型的基因克隆及其功能研究

来源 :2013年中国科学院大学海洋科学学术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:andyvssammi
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  IκBa作为NF-κB转录因子的调节剂,参与了免疫反应、细胞凋亡、病毒感染等多种生理、病理过程.目前硬骨鱼中Iκ Ba的研究较少,并且同一种鱼类中不同亚型的IκBa结构、功能是否相同也鲜见报道.本研究利用RACE技术克隆获得了石斑鱼IκBa两种亚型(EcIκBa1和EcIκBa2)的cDNA全长.生物信息学分析显示:EcIκ Ba1和EcIκBa2的cDNA全长分别为1629bp和1441bp,编码318和308个氨基酸,其中EcIκ Ba1含有6个ANK结构域,而EcIκBa2则含有5个ANK结构域,两者均在其N端含有一个PEST序列,在C端含有一个保守的降解序列DSGLDS,除此之外EcIκBa2在其C端还含有一个NES序列.EcIκBα1和EcIκ Ba2基因组全长分别为4092bp和2419bp,均含有6个外显子和5个内含子.石斑鱼IκBa的两种亚型呈泛细胞分布,且在免疫相关组织中分布较多.构建pEGFP-C1-EcIκ Ba融合蛋白转染GS细胞显示:EcIκBα1主要分布在细胞质中,EcIκBa1呈现出全细胞分布.双荧光素酶报告基因显示:EcIκBa1和EcIκBa2能明显降低石斑鱼的C-Rel和p65NF-κB的活性,说明EcIκ Ba1和EcIκBa2是石斑鱼NF-κB的天然抑制剂.LPS,SGIV和Vibrio alginolyticus感染实验显示:病原感染后,EcIκ Ba1和EcIκBa2的相对表达量均有上调,且EcIκBa2的上调更明显.此外,过表达EcIκ Bα1和EcIκBa2均能能抑制SGIV的MCP的表达,这说明过表达IκBa可能抑制SGIV的复制.由此我们推测石斑鱼IκBa通过对C-Rel和p65NF-κB的调节,在病原的感染中起了重要作用,并且EcIκ Ba2在此过程中所起的作用更大一些.
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