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目的:观察隔药饼灸对克罗恩大鼠血清外泌体中miRNAs的影响并对自噬相关差异miRNAs进行验证,探索隔药饼灸治疗克罗恩病的整体效应。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组和隔药饼灸组,采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠的方法制备大鼠克罗恩病模型;隔药饼灸组在模型组的基础上给予大鼠隔药饼灸天枢穴(双侧),气海穴进行治疗;对各组大鼠采用大体肉眼观察,结肠肉眼观察,结肠组织病理学改变观察的方法进行模型鉴定,通过Illumina HiSeq TM 2500测序和生物信息学分析,筛选各组大鼠血清外泌体差异miRNAs并进行靶基因预测,并采用RT-q PCR和双荧光素酶报告基因进行相关验证。结果:TNBS造模后,与正常组大鼠相比,模型组大鼠皮毛发黄无光泽且粗糙凌乱,食量不佳,肛周污秽沾有稀便,垫料脏乱,气味浓烈,暴露腹腔后可见结肠明显缩短,增厚增粗,肠管内明显积气,部分大鼠可见肠组织粘连,巨结肠或肠梗阻;剪开肠道后可见肠黏膜表面欠光滑,肠壁增厚,伴有散在的水肿,充血,溃疡等,溃疡表面沾有粪便不易漂洗等,部分大鼠可见铺路石样改变,提示模型制备成功,隔药饼灸组大鼠上述各项病理改变均有不同程度改善。大鼠血清外泌体小RNA浓度与质检,测序质控均合格,模型组和正常组相比,差异极显著的miRNAs为26个(P<0.01),差异显著的miRNAs为41个(P<0.05);模型组和隔药饼灸组相比,差异极显著的miRNAs为15个(P<0.01),差异显著的miRNAs为27个(P<0.05);与正常组相比,模型组差异miRNAs的表达以上调居多;与模型组相比,隔药饼灸组差异miRNAs的表达以下调居多;KEGG分析表明各组大鼠差异miRNAs的靶基因功能均在PI3K-Akt等信号通路具有较高的富集程度;正常组和模型组,模型组和隔药饼灸组之间,有7个共有的差异极显著(P<0.01)miRNAs和11个共有的差异显著(P<0.05)miRNAs,比对数据库并结合查阅文献,挑选出相对更可能对自噬产生影响的miRNAs分别为rno-miR-30b-5p, rno-miR-142-3p,rno-miR-106b-5p,rno-miR-30c-5p,RT-q PCR验证表达趋势与测序趋势具有一致性,荧光素酶报告基因表明ATG12,ATG5为miR-30b-5p的靶基因。结论:隔药饼灸可以下调TNBS诱导的克罗恩大鼠血清外泌体中多数miRNAs的表达,其中4个差异miRNAs(rno-miR-30b-5p,rno-miR-142-3p,rno-miR-106b-5p,rno-miR-30c-5p)PCR检测结果与测序结果趋势具有一致性,且miR-30b-5p对ATG12,ATG5具有靶向调控作用,提示隔药饼灸可能通过抑制克罗恩大鼠血清外泌体中miR-30b-5p从而发挥调控自噬的作用。