大洋来源杂色曲霉ZBY-3的新霉素抗性突变株筛选获取及其新产活性产物研究

来源 :2014年中国药学大会暨第十四届中国药师周 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenchen19880908
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利用新建立的超声介导的新霉素抗性筛选方法,从原始菌株杂色曲霉ZBY-3筛选获得了30株抗性突变株,并通过抗性试验证实了突变株对新霉素的获得性抗性。利用第四、第六、第八代菌株,对原始株ZBY-3及其30株突变株分别进行了三批次相同条件下的发酵培养和提取物制备,制得了各菌株发酵物的乙酸乙醋提取物,再利用MTT法测试了这些提取物在100μg/mL浓度下对K562细胞的抑制活性。在MTT法活性测试中,ZBY3提取物对K562细胞并没有显示任何抑制活性(抑制率为1.8%),但22株突变株样品却对K562细胞显示了明显抑制作用(IR%>20%),其中16株突变株样品对K562细胞的抑制率超过了40%。这些活性测试结果表明,22株突变株获得了可代谢产生抗肿瘤活性产物的代谢能力。对其中7株活性突变株及其原始株ZBY-3的乙酸乙醋提取物进行了HPLC-PDAD-UV和HPLC-ESI-MS分析,结果从7株突变株样品中均检测到了ZBY 3提取物中没有的许多小分子代谢产物,从UV和MS检测水平证实了原始株ZBY-3中沉默的有些次级代谢途径在这些突变株中得到激活,从而表达产生了相应次级代谢产物。这还从对其中一株突变株200-2003h 1-2新产活性产物的研究结果得到了进一步验证。通过与原始株ZBY-3发酵提取样品直接对照,采用活性测试与化学检测(TLC及HPLC分析)相结合跟踪的分离模式,通过追踪分离突变株新产活性代谢产物,分离阐明了突变株200-200 3h 1-2新产6个活性产物:cyclo(D-Pro-D-Phe)(1),cyclo(D-Tyr-D-Pro)(2), phenethyl 5-oxo-L-prolinate(3),cyclo(L-IIe-L-Pro)(4),cyclo(L-Leu-L-Pro)(5)和3(3,Sa,9a-trihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-then-6-one(6)。
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