厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6及ESAT-6/CFP-10融合蛋白诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达

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目的结核病是结核分枝杆菌(MTB)引起的,目前世界上死亡率最高的慢性传染病。和厚朴酚(honokiol,HNK)是传统中药木兰科植物厚朴(Magnolia officinalis)当中纯化出来的具有生物活性的化合物,具有广谱抗菌、抗炎,抗氧化,抗肿瘤及抗血管增生等作用。本文的目的是研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)、培养滤液蛋白10(CFP-10)及ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨结核的免疫病理机制。方法体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞,使用MTS法检测HNK(0~80μmol/L)对A549细胞的毒性作用,确定合适的药物实验浓度。以不同浓度的CFP-10、ESAT-6及ESAT-6/CFP-10融合蛋白(0~40μg/ml)为抗原刺激A549细胞,使用ELISA法检测处理后A549表达的IL-8水平,选择最适刺激浓度。将CFP-10、ESAT-6及ESAT-6/CFP-10融合蛋白刺激后的A549细胞与不同浓度的HNK(0~20μmol/L)共同培养24小时后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对各种细胞因子的剂量依赖抑制。结果 20μmol/L及以下浓度的和厚朴酚对A549细胞无明显毒性作用。抗原最适刺激浓度为5μmol/L。CFP-10、ESAT-6及ESAT-6/CFP-10融合蛋白夫人刺激均可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes表达水平的升高。HNK(0~20μmol/L)可以抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达,并且这种抑制作用呈剂量依赖性。结论和厚朴酚能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达,有望在临床肺结核的防治中发挥重要作用。
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