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木霉菌Sm1蛋白(small one protein)是从Trichoderma virens中分离得到的一种低分子量、富含半胱氨酸的疏水性蛋白,属于蛋白类激发子,与Cerato-platanin基因家族有很高的同源性,具有诱导植物免疫抗性的作用。该小蛋白分子对植物和微生物无毒,能诱导棉花、水稻活性氧的释放以及葡聚糖酶、几丁质酶和过氧化物酶等防御反应基因的局部和系统表达。关于木霉Sm1基因表达特性研究国内外报道较少,为此本研究首先从华东地区分离的绿木霉菌株中克隆Sm1基因,然后通过该基因的原核表达获得纯化的融合蛋白质,为今后利用Sm1进行转基因抗性育种、创制新蛋白农药和揭示木霉菌诱导植物免疫分子机理奠定基础。木霉菌是重要的防治植物病害的生防微生物之一,它能分泌多种小分子化合物诱导植物产生局部或系统抗性。本文从绿木霉菌(Trichodermavirens)YZ2612中克隆获得了小分子蛋白基因Sm1,通过对Sm1基因ORF分析,发现其cDNA全长为414bp,编码138个氨基酸。构建了融合表达载体pET-28a(+)-Sm1,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现优化表达,获得与理论值相符的融合蛋白。对蛋白诱导条件(温度、诱导浓度、诱导时间)进行了优化。结果表明:在24℃、IPTG=1mmol/L时,对目的蛋白诱导4h的效果为最佳。IPTG诱导4h后,目的蛋白表达量增幅不明显,保持在一个稳定的趋势。pET-28a(+)载体是带有T7lac启动子的原核表达载体,由T7RNA聚合酶负责转录翻译,在载体的多克隆位点两端各带有一个His-Tag,有助于目的蛋白的纯化和检测,依据转录翻译区的氨基酸序列标签和目的蛋白的序列(约14kD),融合表达蛋白分子量在19kD左右,符合实验预期。通过变性、洗涤、复性等过程对Sm1蛋白进行了初步纯化,为下一步构建转基因抗性植株、创制新型蛋白农药提供基因资源。