【摘 要】
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目的 首次合成的马蹄金素衍生物Y101,作为抗乙肝新药具有全新化学骨架,可直接干扰乙肝病毒DNA合成,在乙肝病毒表面合成抗原,具有多靶点抗乙肝病毒,生物利用度高,不需长期持续用药的特点.人肝癌细胞株HepG2细胞是肝脏毒性评价中最常用的肝细胞系模型,其具有人类肝细胞的多种代谢酶活力和其他特征,本文采用HepG2细胞来评价Y101在抗乙肝病毒的同时对肝细胞的线粒体毒性,为临床试验剂量设计和合理用药提
【机 构】
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天津药物研究院新药安全评价有限公司,天津300193
【出 处】
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中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次(2016年)学术交流大会
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目的 首次合成的马蹄金素衍生物Y101,作为抗乙肝新药具有全新化学骨架,可直接干扰乙肝病毒DNA合成,在乙肝病毒表面合成抗原,具有多靶点抗乙肝病毒,生物利用度高,不需长期持续用药的特点.人肝癌细胞株HepG2细胞是肝脏毒性评价中最常用的肝细胞系模型,其具有人类肝细胞的多种代谢酶活力和其他特征,本文采用HepG2细胞来评价Y101在抗乙肝病毒的同时对肝细胞的线粒体毒性,为临床试验剂量设计和合理用药提供参考.方法 体外培养HepG2细胞,取处于对数生长期的HepG2细胞,加入不同浓度的Y101,24h后移去药物加入MTT作用4h后测定OD值,计算其对HepG2细胞增殖的抑制率；不同浓度Y101作用HepG2细胞24h后移去,继续培养5天,每2天换液一次,于第6天收集细胞,加入终浓度10ug/ml的罗丹明,37℃孵育30min,PBS洗涤收集后用流式细胞仪测定平均荧光强度即线粒体膜电位,终浓度100uM的拉米夫定和阿德福韦酯作为阳性对照药；不同浓度Y101作用HepG2细胞24h后移去,继续培养5天,每2天换液一次,于第6天收集细胞,加入终浓度为10uM的DCFH-DA,37℃孵育15-20min,PBS洗涤收集后用流式细胞仪测定平均荧光强度即细胞活性氧含量,100uM的拉米夫定和阿德福韦酯作为阳性对照药；细胞处理方法同上,于第6天收集细胞培养液上清,测定每106个细胞的乳酸含量,比较不同药物浓度条件下细胞的乳酸生成水平,综合评价Y101的线粒体毒性.结果 随Y101浓度的增大,OD值递减,说明存活细胞数递减,药物毒性增大,当浓度为400uM、600uM时,抑制率分别为68.9％、90.4％,通过拟合曲线计算出Y101对HepG2细胞的IC50值为359uM.与对照组比较,Y101400uM (196μg/ml)显著降低HepG2细胞的线粒体膜电位,显著增加细胞活性氧含量,显著升高细胞乳酸生成水平,具有明显的线粒体毒性.200uM剂量下未见明显的线粒体毒性.结论 400uM(相当于猴口服Y10130mg/kg90天后血清Cmax的240倍)的Y101对体外培养的HepG2细胞具有显著的线粒体毒性,200uM(相当于猴口服Y 1013 0mg/kg90天后血清Cmax的120倍)未见明显的线粒体毒性.结果表明Y101的线粒体毒性安全范围较大,本实验结果对临床试验剂量设计和临床用药具有一定的指导意义.
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