【摘 要】
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目的 通过RNA干扰(RNAi)技术选择性下调大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)高血压相关基因SLC7a8的表达,探讨该基因在高血压发病机制中的作用。方法 设计并合成3个针对大鼠SLC7
【机 构】
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温州医学院附属第一医院心血管内科 温州医学院心血管生物和基因研究所 325000
【出 处】
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第五届钱江国际心血管病会议暨2011浙江省心血管病年会
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目的 通过RNA干扰(RNAi)技术选择性下调大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)高血压相关基因SLC7a8的表达,探讨该基因在高血压发病机制中的作用。方法 设计并合成3个针对大鼠SLC7a8基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照。将上述3个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染NRK-52E内,通过流式细胞仪估算转染效率后经RT-PCR初步筛选高效率干扰片段,用western-blot检测蛋白水平的干扰效率,采用紫外分光光度法检测空白对照组、siRNA-con转染组和SLC7a8基因特异性沉默组不同时间点6、12、24、36、48、60、72、120min各组NRK-52E内左旋多巴的浓度,并绘制浓度-时间变化趋势曲线。结果 流式细胞仪测定siRNA转染NRK-52E效率为94％,RT-PCR初步筛选结果显示siRNA-1、3干扰效率较高,western-blot检测显示siRNA-3组在蛋白水平的干扰效率较高,而对照组siRNA-con与空白对照组(Blank)的SLC7a8表达差异不明显。通过紫外分光光度法检测NRK-52E对左旋多巴的吸收结果显示干扰组不同时间点6、12、24、36、48、60、72、120min各组细胞内左旋多巴浓度均低于siRNA-con转染组和空白对照组,浓度-时间变化趋势差异较明显；对照组siRNA-con与空白对照组(Blank)相比则无明显差异。结论 RNA干扰技术能选择性下调大鼠肾小管上皮细胞SLC7a8基因的表达水平；slc7a8基因特异沉默后NRK-52E对左旋多巴的吸收在各个不同时间点6、12、24、36、48、60、72、120min均降低,浓度-时间变化趋势明显,初步揭示了SLC7a8基因的潜在功能,提示SLC7a8基因可能是高血压病新的相关基因。
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