【摘 要】
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木霉是广泛存在于自然界中的一种真菌,常被用于植物病害的防治。gz-2菌株是从土壤中筛选出的一株对香蕉枯萎病菌有较强抑制效果的哈茨木霉。为了进一步开展gz-2菌株的定殖规
【机 构】
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广西作物病虫害生物学重点实验室; 广西农业科学院微生物研究所; 贺州学院食品与生物工程学院;
【基金项目】
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广西自然科学基金(2016GXNSFBA380173);广西作物病虫害生物学重点实验室开放基金(2015-KF-1);广西农业科学院基本科研业务专项(桂农科2016JZ15,2015YT79,2015JZ61)
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木霉是广泛存在于自然界中的一种真菌,常被用于植物病害的防治。gz-2菌株是从土壤中筛选出的一株对香蕉枯萎病菌有较强抑制效果的哈茨木霉。为了进一步开展gz-2菌株的定殖规律及环境适应性等方面的研究,就需要对该菌进行相应的分子标记。绿色荧光蛋白（GFP）标记是相对成熟的标记技术,为提高哈茨木霉gz-2菌株原生质体的形成率和转化率,从而快速、高效地获得绿色荧光标记菌株。本研究采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系,分别从菌株的菌龄及酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株绿色荧光标记的条件进行了优化。明确gz-2菌株GFP标记的最佳条件为:木霉培养36h,菌丝酶解3.5h,每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,转化子再生培养基中含潮霉素B浓度为600μg/mL。最终筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株。该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性。
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