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【目的】以具有一定细菌毒性的化合物TY-A为例,阐述背景菌苔显微分析在Ames试验中的应用,以规避Ames试验中单纯依靠肉眼观察对试验结果判定的局限性。【材料和方法】Ames菌株选用TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535,试验前需对各菌株进行组氨酸缺陷鉴定(his-)、脂多糖屏障缺陷鉴定(rfa)、紫外线修复缺陷鉴定(uvrB)、氨苄青霉素抗性鉴定(pKM101)、四环素抗性鉴定(PAQ1)、自发回变数鉴定以及对阳性突变剂的敏感性鉴定,合格后使用。采用平皿掺入法,肉眼观察并结合背景菌苔显微分析,找出TY-A Ames试验的剂量范围。TY-A剂量设置为5000μg/皿、2500μg/皿、1250μg/皿、625μg/皿、312.5μg/皿、156.25μg/皿、78.125μg/皿,另设DMSO溶媒对照。【结果】TY-A剂量在5000μg/皿是出现明显沉淀和明显抑菌作用(显微镜观察40×:TA97、TA102,背景菌苔完全消失;TA98、TA100、TA1535,背景菌苔明显稀疏,菌苔中菌落增大。肉眼观察:TA97、TA102;无菌落生成;TA98、TA100,回变菌落数降低;TA100、TA1535;伴有大量细密点状菌落);2500μg/皿出现沉淀和抑菌作用(显微镜观察40×:TA97、TA102,背景菌苔消失,单个菌落增大;TA98、TA100、TA1535,背景菌苔稀疏,菌苔中菌落增大。肉眼观察:TA102;无回变菌落生成:TA97、TA98、TA100,回变菌落数降低:TA97、TA102,伴有大量细密点状菌落。):1250μg/皿出现微量沉淀和抑菌作用(显微镜观察40×:TA97、TA102,背景菌苔消失,单个菌落增大;TA98、TA100、TA1535,背景菌苔稀疏,菌苔中菌落增大。肉眼观察:TA97、TA98、TA102,回变菌落数降低;TA97、TA102,伴有大量细密点状菌落。);625μg/皿出现极轻微抑菌作用(显微镜观察40×:TA97、TA102背景菌苔稀疏,菌苔中菌落增大。肉眼观察:TA102,回变菌落数略有降低。)312.5μg/皿、156.25μg/皿、78.125μg/皿和DMSO溶媒对照均未出现明显抑菌作用,且自发回变数均在正常范围内。【结论】肉眼观察到的大量密集菌落易被判定为假阳性结果,结合显微分析可做出准确的判定。最高剂量设定在有一定沉淀和抑菌作用的1250μg/皿和2500μg/皿之间,为2000μg/皿,同时兼顾TY-A对各菌株强弱不等的抑菌能力,剂量设置为2000μg/皿、1000μg/皿、500μg/皿、125μg/皿和31.25μg/皿。