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目的 了解临床分离的铜绿假单胞菌形成生物被膜的能力及形成生物被膜后的耐药性变化,探讨tolA、ndvB两耐药基因在浮游菌和生物被膜菌的分布和表达,以期为生物被膜菌感染治疗策略提供新的研究方向.方法 收集临床分离的铜绿假单胞菌60株,采用微孔板构建生物被膜,甲醇固定、结晶紫染色后显微镜观察法筛选出生物被膜阳性的菌株;采用微量肉汤稀释法测定生物被膜菌和其浮游菌妥布霉素、庆大霉素和阿米卡星的MIC值;聚合酶连反应(PCR)检测所有试验菌株的tolA和ndvB基因;实时荧光定量PCR检测生物被膜菌和浮游菌tolA和ndvB基因相对表达量.