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目的:构建能够表达弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15Ⅱ 的工程菌,获得纯化的目的蛋白刺激巨噬细胞,借以观察弓形虫基因型相关的效应分子对巨噬细胞偏移的影响。方法:从Ⅱ型弓形虫 PRU 株中提取总 RNA,扩增该基因型弓形虫的 GRA15Ⅱ 编码基因,连接 T 载体,构建重组质粒;将重组质粒转化至 XL-Blue（Top10）感受态大肠杆菌,扩增培养,提取菌种质粒测序;重组质粒与表达载体经双酶切、连接得到 pet28a-gra15Ⅱ;将 pet28a-gra15 Ⅱ转化至 DH5α感受态大肠杆菌中扩增培养,提取质粒测序。将测序正确的 pet28a-gra15 Ⅱ转化至 BL21 感受态大肠杆菌中,挑取单克隆扩增培养,得到目的工程菌;加 IPTG 诱导工程菌进行蛋白表达。经 Western Blot鉴定、纯化后得到目的蛋白 GRA15Ⅱ。体外分别用 GRA15Ⅱ（A 组）、LPS（B 组）、PBS（C 组）、小牛血清白蛋白（D 组）分别刺激小鼠巨噬细胞 RAW264.7,观察细胞形态的变化;分别收集各组细胞上清与贴壁巨噬细胞。ELISA 检测细胞上清中IL-10、IL-12、Arg-1 和 iN OS 的表达;qR T-PCR 检测巨噬细胞 IL-10、IL-12、Arg-1和 iN OS 的 mRNA 表达。结果:1.通过原核表达及分离纯化成功得到目的蛋白 GRA15Ⅱ。经 Western blotting鉴定,确认 GRA15Ⅱ。2.体外细胞刺激实验显示,GRA15Ⅱ（A 组）与 LPS（B 组）中 RAW264.7 发生了显著变化,具体表现为细胞外形由圆形变为多边形、有伪足伸出。3. A 组与 B 组结果见到,GRA15Ⅱ 和 LPS 可驱动巨噬细胞向经典途径活化为M1; C 组与 D 组对巨噬细胞偏移方向未见显著影响。ELISA 显示,A 组与 B 组的细胞上清中 iN OS 与 IL-12 含量均显著高于 C 组与 D 组,而四组细胞上清中 IL-10与 Arg-1 含量无显著差别;qRT-PCR 结果显示,A 组与 B 组细胞中 iN OS 与 IL-12的 mRNA 明显上调、C 组与 D 组无明显变化,而四组细胞中 IL-10 与 Arg-1 的 mRNA较低且均无显著变化。结论:通过体外原核表达获得了弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15Ⅱ。 GRA15Ⅱ 可驱使RAW264.7 向 M1 方向发生偏移。