【摘 要】
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将含有鹅源副粘病毒(NA-1株)F基因的重组质粒PMDF用限制性核酸内切酶XbaⅠ和SphⅠ双酶切,经琼脂糖凝胶电泳,回收纯化,得到F基囚.用XbaⅠ和SphⅠ将pFastBacⅠ质粒双酶切,回收,
【机 构】
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吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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将含有鹅源副粘病毒(NA-1株)F基因的重组质粒PMDF用限制性核酸内切酶XbaⅠ和SphⅠ双酶切,经琼脂糖凝胶电泳,回收纯化,得到F基囚.用XbaⅠ和SphⅠ将pFastBacⅠ质粒双酶切,回收,将酶切的pFastBacⅠ质粒与F基因用T4DNA连接酶进行粘性末端连接,得到阳性重组质粒PFF.PFF转化大肠杆菌DH10Bac后,F基因在助手质粒(helperplasmid)的帮助下,通过转座进入Bacmid,构建了重组Bacmid(re-Bacmid).在含有X-gal/IPTG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上,筛选白色菌落后,提取re-Bacmid转染Sf-9昆虫细胞.在昆虫细胞内,re-Bacmid经复制、表达、装配,形成重组杆状病毒,并表达F蛋白.经SDS-PAGE和Weston-blot分析,表达的F蛋白的分子量63kDa,并证明在昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化.表达的F蛋白约占细胞总蛋白的10﹪.
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