【摘 要】
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多管藻R-Phycoerythrin(RPE)为三峰型藻红蛋白,最大吸收峰分别位于498、540、565 nm,室温荧光发射峰位于575 nm,荧光量子产率高,斯托克位移大,是优秀的荧光标记物。RPE用于荧
【机 构】
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山东轻工业学院食品与生物技术学院; 山东省农业科学院,山东省动物疫病防治与育种重点实验室; 山东大学微生物技术国家重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(40676078);兽医生物技术国家重点实验室(SKLVBF200909)资助
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多管藻R-Phycoerythrin(RPE)为三峰型藻红蛋白,最大吸收峰分别位于498、540、565 nm,室温荧光发射峰位于575 nm,荧光量子产率高,斯托克位移大,是优秀的荧光标记物。RPE用于荧光检测须先经化学交联剂衍生然后与抗体等蛋白质交联成荧光示踪剂。RPE化学衍生时既要考虑引入基团数又要考虑交联剂对RPE结构与功能影响。本文首次以光谱法表征了不同浓度的化学交联剂SPDP对RPE的吸收光谱、荧光光谱及其引入吡啶二硫基基团数影响。结果表明,RPE的吸光度和荧光强度随着SPDP/RPE摩尔比的增加均不同程度降低,在SPDP/RPE摩尔比为20-300时RPE的结构与功能稳定,吸收光谱和荧光光谱特性未发生改变。RPE上引入的吡啶二硫基团数在SPDP活化起始1.5 h内随着时间而迅速增加,2h后趋于稳定,引入的吡啶二硫基随着SPDP/RPE摩尔比增加而增加。兼顾RPE的光谱特性和引入基团数,SPDP衍生RPE时SPDP/RPE摩尔比以20-300为宜,活化时间以2 h为宜。
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