【摘 要】
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目的:构建表达hIFN-λ3基因的真核表达载体,并在COS-7 细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。方法:用口腔滤泡炎病毒VSV 刺激A549人肺腺癌细胞,抽提总RNA,经RT-PCR 获得
【机 构】
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苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室;
【基金项目】
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江苏省高校自然科学研究项目(01KJB180001)
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目的:构建表达hIFN-λ3基因的真核表达载体,并在COS-7 细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。方法:用口腔滤泡炎病毒VSV 刺激A549人肺腺癌细胞,抽提总RNA,经RT-PCR 获得全长cDNA,与pcDNA3.1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hIFN-λ3,并在COS-7细胞中进行表达,采用微量细胞病变抑制试验研究表达产物的抗病毒活性。结果:经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序确证重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且确为hIFNλ-3,与GeneBank 报告序列完全一致,并成功地在COS-7 细胞中瞬时表达了具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。结论:本研究成功地克隆出hIFN-λ3基因编码序列并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了rhIFN-λ3蛋白具有抗病毒活性,为今后干扰素的基因治疗奠定了基础。
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