新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型的分子鉴定

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<正>目的:评价针对α和a交配型位点内GEF1α/a基因部分片段的PCR—RFLP万法在鉴定新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型中的作用。方法:筛选交配型位点内的GEF1α/a基因进行PCR- RFLP分析。根据各主要基因型和交配型参考株的GEF1α/a基因保守序列设计引物,扩增受试新生和格特隐球菌GEF1α/a基因部分片段。利用DNAMAN和Vector NTI软件进行序列比对、限制性内切酶的筛选、酶切图谱分析和模拟电泳。选择EcoT14Ⅰ和HapⅡ限制性内切酶分别对125株新生和格特隐球菌的GEF1α/a基因扩增片段进行RFLP分型。结果:所有受试的82株新生隐球菌和43株格特隐球菌均扩增出1.3kb片段,而罗伦隐球菌、白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、阿萨希毛孢子菌、烟曲霉和黄曲霉参考株均扩增阴性。对扩增片段的酶切和谱型分析准确鉴定所有125株新生和格特隐球菌的种、变种、基因型和交配型。结论:针对CEF1α/a基因的PCR-RFLP方法特异性高、稳定性好,适用于新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型的同步和快速鉴定以及进一步的分子流行病学分析。
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