FGF6基因保护心肌细胞凋亡的实验研究

来源 :中华医学会第十五次全国心血管病学大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangjunhua66
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目的:克隆小鼠成纤维细胞生长因子6(FGF6)基因cDNA的读码框(CDS),构建携带FGF6基因的重组真核表达载体,并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2细胞中进行表达,测定转染后FGF6基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:从小鼠心脏组织提取总RNA,通过RT-PCR得到总cDNA,PCR法扩增,产物连接pGEM-T Easy载体测序分析正确后,再以PCR方法扩增,将其连接入真核表达质粒PIRES2-DsRed2。以PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将重组载体PIRES2-DsRed2-FGF6用脂质体包裹转染大鼠心肌细胞(H9C2),RT-PCR法检测转染后FGF6 mRNA表达水平,荧光显微镜观察转染效率。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行FGF6质粒转染,Western blot方法检测活化Caspase-3表达。结果:成功克隆了小鼠FGF6基因cDNA,重组真核表达载体PIRES2-DsRed2-FGF6构建成功,且证实转染后大鼠心肌细胞的FGF6 mRNA表达明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05),转染FGF6基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),FGF6基因能明显抑制血清饥饿引起的活化Caspase3表达(P<0.05)。结论:成功克隆了FGF6基因,并构建了真核表达载体PIRES2-DsRed2-FGF6,能够在H9C2细胞中获得有效过表达,并证实FGF6基因可促进心肌细胞的增殖及保护心肌细胞的凋亡,故推测其促细胞增殖,抗凋亡功能可能是其参与胚胎心脏发育的机制之一,这为进一步探讨FGF6基因的生物学功能奠定了基础。
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