【摘 要】
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萜类是一类具有重要价值的次生代谢产物。随着一些重要的萜类化合物的发现,萜类的生物合成途径的研究受到极大关注。萜类合酶家族在催化这一庞大天然产物的生物合成中起着巨
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萜类是一类具有重要价值的次生代谢产物。随着一些重要的萜类化合物的发现,萜类的生物合成途径的研究受到极大关注。萜类合酶家族在催化这一庞大天然产物的生物合成中起着巨大的作用。萜类合酶主要催化单萜、倍半萜和二萜的生物合成,即分别催化geranyldiphosphate(GPP)、farnesyl diphosphate(FPP)和geranylgeranyl diphosphate(GGPP)形成单萜、倍半萜和二萜。随着大量有特殊功能的萜类合酶在植物中被发现,真菌中的萜类合酶研究也倍受重视。灵芝是一种重要的药用真菌,其基因组测序工作的完成,为灵芝萜类合酶的研究提供了基础。本文以灵芝菌丝为材料提取总RNA,合成cDNA,以已发表的基因组序列为参照设计引物,通过PCR方法克隆了12个萜类合酶全长基因,并通过测序验证了其正确性。同时将获得的基因转入到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)进行了原核表达,经过IPTG诱导后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对其表达产物进行分析。本文还利用real-time PCR的方法对这些基因在灵芝不同发育时期(菌丝期、原基期、子实体期)的表达量进行研究分析,发现这些基因大部分都在菌丝期的表达量很高,而在原基和子实体时期相对较低。这为进一步研究灵芝的萜类生物合成途径及其相关调控提供了基础。
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