【摘 要】
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目的 探讨直接机械分离并结合酶法消化的非梯度法用于开展IVF实验室来源的人卵巢黄素化颗粒细胞的原代培养效果,并观察比较其分别在DMEM/F12和M199两种培养基条件中的细
【机 构】
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中山大学附属第一医院 510080
【出 处】
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广东省医学会第五次生殖医学学术会议
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目的 探讨直接机械分离并结合酶法消化的非梯度法用于开展IVF实验室来源的人卵巢黄素化颗粒细胞的原代培养效果,并观察比较其分别在DMEM/F12和M199两种培养基条件中的细胞学差异.方法 对10例接受体外受精患者卵泡液中分离的卵巢黄素化颗粒细胞进行机械切割和收集,0.2g几I型胶原酶处理10min后将细胞洗涤并平分培养在DMEM/F12和M199两种培养基条件下, 每天观察记录,在Day10时,利用免疫组化法检测并比较两组颗粒细胞的卵泡刺激素受体(FSHR)蛋白和干细胞标志性OCT4蛋白的阳性率.结果 使用非梯度法从卵泡液中分离培养的卵巢黄素化颗粒细胞,D10染色时显示,两组90％以上呈FSHR蛋白阳性表达,细胞状态良好.组间的培养效果差异为,M199组细胞增殖明显快于DMEM/F12,FSHR蛋白阳性率无显著差异,但M199组早期会出现部分圆形的细胞,经免疫荧光染色鉴定显示为FSHR蛋白阳性、OCT4弱阳性.结论 直接机械分离并结合酶法消化来制备颗粒细胞的原代培养方法,较传统梯度法更为简便和高效,M199培养液相较于DMEM/F12更适合进行颗粒细胞原代的培养,且提示早期培养过程中可能存在具有干性的圆形细胞.
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