【摘 要】
：
目的 应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin1的表达,检测Beclin1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及P53、BAX、 Bcl2等基因表达的影响.方法 分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H2O2刺激等处理后Beclin1的表达,然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞.采用Real-timePCR及Westem blot法检测沉默效
【机 构】
：
第二军医大学实验动物中心,上海200433
论文部分内容阅读
目的 应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin1的表达,检测Beclin1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及P53、BAX、 Bcl2等基因表达的影响.方法 分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H2O2刺激等处理后Beclin1的表达,然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞.采用Real-timePCR及Westem blot法检测沉默效果后,采用CCK-8实验检测沉默后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,然后采用Westem blot检测相关基因蛋白表达水平.结果 饥饿与H2O2刺激均能导致Beclin 1表达水平的改变.采用geneexpresso转染试剂对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞转染效率可达到90％以上,Real-time PCR及Western Blot结果显示所设计的Beclin1 siRNA可有效降低Beclin1的表达.Beclin1基因沉默后,裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖抑制率均显著高于对照组,细胞早期凋亡与晚期凋亡率均显著升高,同时P53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、mTOR等表达量下降.结论 Beclinj在裸鼹鼠成纤维细胞抵抗饥饿、H2O2刺激等过程中表达量显著变化,同时抑制Beclin 1的表达,可抑制裸鼹鼠细胞细胞增殖,促进其凋亡,这提示Beclin1基因对裸鼹鼠自噬、增殖、凋亡起到调控作用.
其他文献
目的 建立镍变应性接触性皮炎ACD小鼠模型,观察模型皮肤镍离子的分布情况,为进一步研究镍接触性皮炎致敏的分子机制和治疗方法.方法 选择24只C57BL/6小鼠,随机分为4组(阳性对照,阴性对照,20％硫酸镍组,30％硫酸镍组),于第0天致敏且第2天激发,分别于激发后的24、48、72h对激发部位皮炎症发炎进行动态评分；HE染色观察激发部位皮肤病理变化.通过同步辐射X射线荧光分析法对皮损组织不同深度
目的 本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路.方法 甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫病学实验室分离、保存,经RNA抽提逆转后从中扩增出甲型流感病毒H1N1PA基因的CDS基因全长序列.通过定向克隆的方法将其连接到pIRES2-GF
目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对小鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后炎症反应的影响.方法 雄性昆明种小鼠随机分为3组,即假手术组、I/R模型组及DMY(500mg·kg-1)组.改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R
Background Exposure to a moderate to high dose of ionizing radiation (IR) not only causes acute radiation syndrome but also induces long-term (LT) bone marrow (BM) injury.The latter effect of IR is pr
目的 平滑肌22α(SM22α)是平滑肌细胞(VSMC)骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关.本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/LoxP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC骨架重构中的作用机制.方法 利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠SM22α基因.在外显子1～2和3～4的非编码区各设计sgRNA位点并将其
目的 分析Mylpf基因在糖尿病长爪沙鼠6种组织中的表达水平,进而探究长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制.方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,使用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织中Mylpf的mRNA和蛋白表达水平.结果 Real-time PCR的结果表明,在骨骼肌、心脏和脑组织中,Mylpf在糖尿病组mRNA表
目的 高胆固醇血症会使机体心血管系统发生损伤,Ghrelin是一种脑肠肽,其与受体(GHSR-la)结合有保护血管内皮功能、抑制血管炎症、改善心功能等作用.本研究拟通过人工低氧对高胆固醇血症小鼠进行干预,观察心肌形态的变化和Ghrelin相关蛋白变化,探究低氧暴露对高胆固醇血症小鼠心肌损伤调控的影响.方法 30只刚离乳C57BL/6小鼠,随机分为对照组(NC,8只)和高胆固醇血症组(H,22只).
目的 利用生化标记方法和微卫星方法分析封闭群KM小鼠群体遗传结构特征,探索封闭群群体遗传结构的最佳分析方法.方法 应用14个生化标记位点和30个微卫星位点,检测30只KM小鼠的遗传质量.应用软件计算封闭群群体的遗传结构参数.结果 生化标记方法检测得到的群体平均杂合度是0.2163,多态性信息含量是0.1699,等位基因数是1.3903.微卫星方法检测得到的群体平均杂合度是0.4864,多态性信息含
目的 初到高原地区的人会出现不同程度的肌肉丢失现象,肌肉丢失是由于高原低氧环境引起的.本研究探究了模拟4000m海拔高度的低氧环境中大鼠肌肉丢失的情况,比较不同低氧暴露时间肌肉丢失水平,为研究低氧诱导肌肉丢失机制提供合适的研究模型.方法 SD大鼠20只,分为常氧组(n=10)、低氧组(n=10).常氧组大鼠饲养于20.9％氧浓度的环境,低氧组大鼠饲养于12.6％氧浓度的环境(相当于海拔4000 m
目的 比较分离培养与PCR方法鉴定实验动物金黄色葡萄球菌和绿脓杆的异同.方法 采用传统分离培养的方法对35只大小鼠金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌进行检测；提取SP和NAC平板24h培养物核酸进行PCR检测.结果 分离培养法检出4只金黄色葡萄球菌阳性,8只绿脓杆菌阳性.PCR鉴定出4只金黄色葡萄球菌阳性,15只绿脓杆菌阳性.结论 PCR方法不仅快速、准确,可防止漏检、误判.