【摘 要】
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通过对实验室已构建的柱花草炭疽菌T-DNA突变体库中各突变体致病力的测定,获得致病力丧失突变菌株994。对其进行菌落生长速率、菌落形态及产孢量等生物学特性的研究,利用TAIL
【机 构】
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中国热带农业科学院环境与植物保护研究所; 海南大学农学院; 中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室(海南大学);
【基金项目】
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国家自然科学基金(31072076,31101408);公益性行业科研专项(201303057);中央级公益性科研院所基本科研业务专项(2015hzs1J002)
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通过对实验室已构建的柱花草炭疽菌T-DNA突变体库中各突变体致病力的测定,获得致病力丧失突变菌株994。对其进行菌落生长速率、菌落形态及产孢量等生物学特性的研究,利用TAIL-PCR克隆标记基因侧翼序列,分析T-DNA插入位点,通过本地blast比对进行序列分析,采用生物信息学方法进行基因预测及功能分析。结果表明,与柱花草炭疽菌野生型菌株CH008相比,突变菌株994表现致病力丧失,生长速率(1.32±0.02)cm/d,与野生型(1.41±0.03)cm/d无显著性差异;产孢量(3.04±0.15)×10~6个/mL,显著低于野生型(9.26±0.14)×10~6个/mL;孢子萌发率(0.00±0.00)%,显著低于野生型(91.14±6.66)%;在分生孢子形态、附着胞形成等方面与野生型并无明显差异。TAIL-PCR扩增得到T-DNA插入位点RB端侧翼序列680 bp,LB端侧翼序列495 bp,经两侧序列拼接本地blast比对,与全基因组同源性为79%,进行生物信息学分析,预测T-DNA插入位点为基因末端外显子附件区域,ORF开放阅读框分析基因编码556个氨基酸,NCBI检索所得基因属焦磷酸硫胺素(TPP)家族,乙酰乳酸合成酶(AHAS)亚科,与乙酰乳酸合成酶催化亚基相似的蛋白质组成。
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