【摘 要】
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目的：观察人脂肪组织周细胞体外分离培养及骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因修饰后增殖能力和成软骨诱导分化的生物学性状,探讨其作为软骨组织工程种子
【机 构】
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510055广州,中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院·口腔医学研究所
【出 处】
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广东省口腔医学会第三次会员代表大会暨第十次学术会议
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目的：观察人脂肪组织周细胞体外分离培养及骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因修饰后增殖能力和成软骨诱导分化的生物学性状,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性.方法：(1)人脂肪组织来源于健康成年女性腹部吸脂术,酶消化法分离出脂肪组织周细胞,接种于20％胎牛血清的高糖DMEM培养基进行原代培养.(2)取第5代脂肪周细胞,采用细胞计数法测定细胞生长曲线,流式细胞仪筛选出CD45-CD56-CD 146+CD34-周细胞.(3)AdBMP-7,AdLaz分别转染筛选出CD45-CD56-CD146+CD34-周细胞,检测外源基因转染效率,并应用RT-PCR检测BMP-7的表达.将周细胞分为3组,A组：转染adBMP-7；B组：转染AdLaz；C组：未转染病毒.用10％胎牛血清、10 ng/mL转化生长因子B1、50 nmol/L抗坏血酸、6.25 mg/L胰岛素的成软骨诱导培养基分别诱导分化.(4)每天用倒置显微镜观察细胞形态及增殖变化.应用RT-PCR检测法检测软骨特异性细胞外基质蛋白Ⅱ型胶原的表达,阿尔新蓝染色法检测其软骨结节形成,评价3组细胞向软骨分化情况.结果：(1)体外培养的脂肪周细胞呈扁平的长梭形,细胞形态均一,传代稳定.免疫组化证实周细胞胞浆内α-SMA蛋白表达阳性,内皮细胞特异性vWF因子表达阴性,胶质细胞特异性GFAP表达阴性.(2) RT-PCR检测证实了BMP-7在脂肪周细胞中的有效表达.病毒转染后,A、B、C组细胞均有矿化结节形成,其中A组矿化结节数目显著多于B,C组(P＜0.01).结论：人脂肪周细胞能向软骨细胞方向诱导分化,可作为软骨组织工程种子细胞.BMP-7腺病毒可有效转染人脂肪周细胞,并促进其软骨向分化,转染的BMP-7能够在人脂肪周细胞中有效表达.
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