【摘 要】
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本试验建立了检测猪轮状病毒抗原的间接夹心ELISA.提纯病毒分别免疫猪和兔,制备的高免血清用硫酸铵沉淀法粗提IgG,再过羟基磷灰石及阴离子交换层析,得到纯化的猪抗RVIgG和兔
【机 构】
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四川农业大学动物医学院,动物传染病与基因芯片实验室,动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川,雅安,625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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本试验建立了检测猪轮状病毒抗原的间接夹心ELISA.提纯病毒分别免疫猪和兔,制备的高免血清用硫酸铵沉淀法粗提IgG,再过羟基磷灰石及阴离子交换层析,得到纯化的猪抗RVIgG和兔抗RVIgG.试验确定了ELISA最佳工作条件:猪抗RV IgG包被浓度为4μg/mL,兔抗RV IgG浓度为3.5μg/mL,；酶标羊抗兔抗体浓度为1∶8000,底物作用时间为15min.阴阳性结果判定的临界OD值为0.161.重复性试验表明该方法重复性较好。间接夹心ELISA不与猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒、猪细小病毒、乙脑病毒、大肠杆菌、猪传染性胸膜肺炎杆菌呈现交叉反应。敏感性试验测定最低抗原检出量为1.2μg/mL.
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