【摘 要】
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本研究对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析.应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株中扩增出大小为1356bp的破伤风毒素C片段基因,该片段是与靶
【机 构】
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扬州大学生物科学与技术学院人兽共患病与免疫学研究室,扬州,江苏,225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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本研究对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析.应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株中扩增出大小为1356bp的破伤风毒素C片段基因,该片段是与靶细胞起结合作用的重链C端基因,经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank上登陆的序列AF154828的同源性达到99.2﹪.将此基因克隆入大肠杆菌融合表达载体pET-30a(+),构建成重组表达质粒pET-TetC,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物为50kD左右的特异性重组蛋白,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的33.5﹪,经免疫印迹试验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原.动物试验证明此重组抗原具有良好的免疫原性,能保护动物免受破伤风毒素的攻击.
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