目的:应激导致下丘脑-垂体-肾上腺（Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA）轴被激活,影响能量稳态和生殖功能。既往研究已经证实Kisspeptin在生殖功能中的作用,近年来发现其主要表达在下丘脑弓状核上,也是调节能量平衡的因子。我们课题组前期研究发现地塞米松可以抑制下丘脑GT1-7神经元细胞（Gn RH、Kisspeptin均有表达和分泌）Kiss1基因m RNA的转录表达和Kisspeptin蛋白的表达水平,而糖皮质激素受体阻断剂RU486则可以拮抗这种作用,提示下丘脑Kisspeptin神经元可能是应激影响能量代谢和生殖功能的一个新的重要中枢靶点。因此,本研究的目的在于探讨应激是否通过下丘脑Kisspeptin神经元上的糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）而影响能量代谢和生殖功能。方法:1.本研究的第一部分主要探讨慢性束缚应激对小鼠能量代谢和生殖功能的影响。我们构建慢性束缚应激小鼠模型,每天监测小鼠体重和食物摄入量,对雌鼠进行阴道上皮脱落细胞涂片判断动情周期。完成28天束缚应激后,进行腹腔葡萄糖耐量试验,并取材。检测血清性激素水平,包括雌鼠LH、FSH和雌激素水平及雄鼠睾酮水平。利用石蜡包埋卵巢/睾丸进行HE染色观察卵巢/睾丸形态。2.本研究的第二部分主要探讨慢性束缚应激对血清皮质醇、泌乳素表达的影响,以及对下丘脑GR、Kiss1基因表达的影响。3.基于上述的研究,我们构建Kisspeptin神经元特异性GR敲除小鼠（Kisspeptin specific glucocorticoid receptor knock out,KGRKO）,通过眼眶内眦静脉取血法采集小鼠上午及下午的血样,ELISA方法检测血清皮质醇水平以评估皮质醇的节律。对小鼠进行束缚应激干预,每天监测小鼠体重,对雌鼠进行阴道上皮脱落细胞涂片判断动情周期。完成28天束缚应激后,采集血清利用ELISA方法检测血清性激素水平,包括雌鼠LH、FSH和雌激素水平及雄鼠睾酮水平。结果:1.束缚应激对小鼠能量代谢的影响。束缚应激组的体重和能量摄入量低于对照组、高脂饮食组和高脂饮食+束缚应激组,雌鼠下降较雄鼠更为明显。高脂饮食+束缚应激组体重和能量摄入量低于高脂饮食组。在普通饲料喂养情况下,不管是雄鼠还是雌鼠,经过28天的束缚应激,葡萄糖耐量均没有统计学差异。而高脂饮食的情况下,高脂饮食+束缚应激组与高脂饮食组相比较,表现出糖耐量减退。2.束缚应激对小鼠生殖功能的影响。束缚应激后,小鼠表现出紊乱的动情周期,LH、FSH较对照组均出现明显下降,而对雌激素和卵巢形态没有影响。对雄鼠睾酮水平、睾丸形态没有影响。3.束缚应激后,雄鼠和雌鼠血清皮质醇、泌乳素水平较对照组均出现明显升高,下丘脑kiss1基因m RNA、Kisspeptin蛋白表达均出现显著性下降。4.我们构建了Kisspeptin神经元特异性GR敲除小鼠（KGRKO）。与GRflox/flox/Kiss1Cre-对照小鼠比,雄性GRflox/flox/Kiss1Cre+KGRKO小鼠血清皮质醇谷值和峰值均无明显差异。而雌性GRflox/flox/Kiss1Cre++KGRKO小鼠与GRflox/flox/Kiss1Cre-对照小鼠比上午血清皮质醇谷值明显升高,下午血清皮质醇峰值无明显差异。束缚应激组与对照组相比、KGRKO+束缚应激组与KGRKO组相比,体重均明显下降。而KGRKO+束缚应激组与束缚应激组相比,体重下降减少,提示束缚应激对能量代谢的影响可能部分通过Kisspeptin神经元上GR起作用。生殖功能方面,束缚应激组和KGRKO+束缚应激组则表现为动情前期缺失或延长的动情周期。KGRKO+束缚应激组血清LH、FSH较KGRKO组出现下降,差异有统计学意义。束缚应激组、KGRKO组和KGRKO+束缚应激组血清睾酮水平均无明显差异。结论:慢性束缚应激导致小鼠体重增加减少,对高脂饮食诱导的体重增加有逆转作用。慢性束缚应激对生殖功能起到负性调控的作用。慢性束缚应激对能量代谢和生殖的影响部分通过下丘脑Kisspeptin神经元上的GR介导的。本研究为慢性束缚应激影响能量代谢和生殖功能提供一个中枢机制,对揭示HPA轴和能量代谢与生殖之间的关系有重要意义。