壁虎醇提物抗宫颈癌SiHa细胞作用及其机制的研究

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目的:本实验旨在研究壁虎醇提物(GEE)对宫颈癌 SiHa细胞的抗肿瘤作用,并对其抗肿瘤机制进行初步探讨。  方法:人宫颈癌 SiHa细胞,体外常规培养,用对数生长期 SiHa细胞进行后续实验,实验分为两部分。(1)壁虎醇提物对SiHa细胞迁移及侵袭的影响:实验剂量(不明显抑制肿瘤细胞增殖的剂量)确定后,进行 SiHa细胞迁移实验。实验分为对照组和不同浓度(0.025、0.05、0.1 mg/mL GEE)壁虎醇提物实验组。用不同浓度的壁虎醇提物分别处理人宫颈癌SiHa细胞24 h后,通过划痕实验观察壁虎醇提物对 SiHa细胞划痕愈合能力的影响;Transwell小室迁移实验及 Transwell小室侵袭实验模型,分别用来检测壁虎醇提物处理后,SiHa细胞迁移及侵袭能力的改变;Western blot被用来检测壁虎醇提物对SiHa细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、血管内皮生长因子(VEGF)和 Rac1蛋白表达的影响。(2)壁虎醇提物对 SiHa细胞增殖及凋亡的影响:不同浓度(0.1、0.2、0.3 mg/mL)壁虎醇提物处理 SiHa细胞后。分别通过 MTT实验和克隆形成实验评估壁虎醇提物体外对 Siha细胞增殖能力及克隆形成能力的影响;壁虎醇提物处理后,倒置显微镜下观察SiHa细胞形态的变化;Hoechst33258染色法用来检测SiHa细胞核形态学的变化;通过Western blot检测壁虎醇提物对SiHa细胞内蛋白表达的影响。  结果:(1)壁虎醇提物对 SiHa细胞迁移及侵袭的影响:壁虎醇提物处理24 h后,0.025 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL GEE实验组SiHa细胞的增殖抑制率分别为1.5%、5.5%、7.3%。划痕实验结果显示壁虎醇提物处理组SiHa细胞划痕愈合能力减弱,壁虎醇提物浓度越高,划痕愈合面积越小。Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,随着壁虎醇提物浓度的增加,穿透的 SiHa细胞数明显减少,即壁虎醇提物能降低 SiHa细胞迁移及侵袭的能力。壁虎醇提物处理后,SiHa细胞内E-cadherin蛋白的表达增多,而VEGF和Rac1蛋白的表达相对减少。(2)壁虎醇提物对 SiHa细胞增殖及凋亡的影响:MTT结果显示壁虎醇提物可显著抑制 SiHa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;壁虎醇提物处理SiHa细胞24 h、48 h、72 h后,IC50值分别为0.318 mg/mL、0.239 mg/mL、0.219 mg/mL;倒置显微镜下可观察到SiHa细胞内形态的变化,与对照组比较,不同浓度壁虎醇提物(0.1、0.2、0.3 mg/mL)作用后的SiHa明显皱缩,细胞数量减少,细胞膜的完整性受损,药物浓度越高损伤越严重;荧光显微镜下观察到SiHa细胞凋亡的典型形态学变化,SiHa细胞可见染色质浓缩、细胞核分裂和体积减少等变化。Western blot结果显示GEE可下调Bcl-2和VEGF蛋白的表达,反之,上调Bax、Cytochrome c(Cyt c)、caspase-9和caspase-3蛋白的表达。  结论:(1)GEE可抑制 SiHa细胞的迁移和侵袭,其机制与 E-cadherin蛋白的表达上调,VEGF和Rac1蛋白的表达下调有关。(2)GEE可抑制SiHa细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与细胞内相关蛋白表达的变化有关。综上所述, GEE可对 SiHa细胞有抗肿瘤活性,可能是通过抑制 SiHa细胞增殖、诱导 SiHa细胞凋亡、抑制SiHa细胞迁移发挥抗肿瘤效应。
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