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本文针对大宗微生物药物—红霉素生产发酵过程的四个方面开展了相关研究:红霉素发酵条件的初步优化、红霉素发酵中后期流加无机氮源对红霉素效价和组份影响研究、红霉素发酵过程放大中的氮源调控研究以及供氧对基因工程菌发酵组份的影响。
通过对红霉素发酵条件的初步优化研究发现:以4%浓度淀粉为碳源时,效价比对照提高16.1%;添加玉米浆比无玉米浆批次效价提高了21.7%;补加补加微量元素的研究表明,发酵前期(46h)可通过补加微量元素,确保氧消耗速率(OUR)维持较好的状态,经统计学方法优化补加微量元素的配方为:硫酸锌0.004%,柠檬酸0.024%,苏氨酸0.042%,上述结果在50L罐上进行验证,红霉素效价可达到最大值10622μg/ml,比对照提高7.6%,且发酵过程稳定性增强。
在对红霉素氮源调控研究中发现:中期80h补加5%硫酸铵有利于发酵过程的维持和组份的改善,与对照组相比,化学效价提高了14.1%,红霉素A(Er-A)提高了21.86%,红霉素B(Er-B)组份相差不大,红霉素C(Er-C)组份比对照组降低了40.09%;中期流加1%的甜菜碱使Er-C组份大大降低(含量仅为52μg/ml),Er-A与Er-C比例高达153.15。说明氮源对红霉素发酵过程中的组份调控是有效的,可以进一步放大应用到工业生产中。
通过25m3中试发酵罐流加硫酸铵验证试验发现:发酵过程流加硫酸铵有利于发酵后期菌体的维持,流加硫酸铵可明显提高发酵液中Er-A含量并降低Er-C含量,硫酸铵成本低廉,有利于大规模推广。
最后为了研究供氧对红霉素发酵组份的影响,我们选用了经过代谢工程改造后强化了羟基化酶和甲基化酶的基因工程菌研究了供氧对红霉素发酵组份的影响,发现在供氧充分时,可实现Er-B向Er-A的完全转化,同时可降低Er-C的含量。