目的:通过壮药龙钻通痹方对类风湿关节炎(RA)大鼠模型的实验观察,结合形态学、病理学、蛋白及基因检测实验,探索壮药龙钻通痹方基于BMP2/Smad8/Runx2/Osterix通路对RA大鼠成骨细胞分化的时序性影响。方法:实验选取96只SD雄性大鼠,随机分为模型组、实验组、甲氨蝶呤对照组、正常组,每组24只。采用佐剂性关节炎大鼠模型,造模成功后,对各组大鼠进行灌胃观察,实验组灌胃壮药龙钻通痹方颗粒剂量为0.27g/100g/d,甲氨蝶呤对照组灌胃甲氨蝶呤片混悬液剂量为0.9mg/kg/d,正常组与模型组每天给予同等剂量的蒸馏水灌胃,灌胃时间共3周,每周结束后每组处死6只大鼠,分别采集腹主动脉血、滑膜、踝关节。从第22d开始停药1周,第28d时进行最后一批取标本。用所取的大鼠踝关节进行HE染色,观察其踝关节病理学改变;以免疫印迹法(Western Blotting)检测RA大鼠膝关节滑膜BMP2、Smad8、Runx2、Osterix蛋白的表达;以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中BMP2、Smad8、Runx2、Osterix蛋白含量;以实时荧光定量PCR(RTQ-PCR)法检测膝关节滑膜BMP2m RNA、Smad8m RNA、Runx2m RNA、Osterixm RNA的表达。结果:(1)大鼠一般情况变化:和正常组比较,模型组、实验组、甲氨蝶呤对照组各时间段的毛色、爪甲、饮食量、精神状态、大便等均较差;实验组在21d时段附近皮毛、食量等恢复较明显,对照组与实验组各阶段未见明显性差别。(2)大鼠膝关节HE染色:21d后,HE染色显示正常组大鼠膝关节滑膜,关节腔,成骨细胞排列等均正常;模型组大鼠膝关节滑膜增生、表面欠光滑、成骨细胞较少,秩序紊乱、关节腔大量炎性渗出物伴淋巴细胞;实验组21d后关节腔未见明显炎性渗出物及狭窄,滑膜无明显增生水肿,层次清晰光滑,成骨细胞排列整齐,呈柱状分布,软骨层得到一定修复,对照组与实验组未见明显性差异。(3)大鼠膝关节滑膜WB检测:结果显示BMP2、Smad8、Runx2、Osterix蛋白在正常组和模型组的4个时间段均无时序性差异;在实验组,21d时段BMP2、Smad8、Osterix蛋白表达最高(P<0.05),但Runx2蛋在14d时段表达最高(P<0.05);对照组各时间段的蛋白差异趋势与实验组无显著性差异。(4)大鼠血清ELISA检测:结果显示BMP2、Smad8、Runx2、Osterix血清蛋白在正常组和模型组时序性表达不明显,实验组的4个时间段中以7d时段表达最弱,21d时段BMP2、Smad8、Osterix表达最强(P<0.05),Runx2血清蛋白21d时段表达弱于14d时段(P<0.05)。(5)大鼠BMP2、Smad8、Runx2、Osterix基因检测:结果显示BMP2m RNA、Smad8m RNA、Runx2m RNA、Osterixm RNA在正常组与模型组在4个时间段无时序性差异;21d时段的BMP2m RNA、Smad8m RNA、Osterixm RNA表达最强,具有显著性差异(P<0.05),与14d时段比较,Runx2m RNA稍有下降(P>0.05),对照组时序性差异与实验组未见明显性差异。结论:1.壮药龙钻通痹方可促进RA大鼠成骨细胞分化以发挥骨保护作用;2.壮药龙钻通痹方促进RA大鼠成骨细胞分化的机制可能与激活BMP2/Smad8/Runx2/Osterix通路有关;3.壮药龙钻通痹方促进RA大鼠成骨细胞分化可能从第7d开始显效,效应峰值可能出现在21d附近。